Nghiên cứu Cannabidiol có tác dụng chống động kinh bằng cách phục hồi chức năng nội tạng hồi hải mã

Bối cảnh và Mục đích

Một phytocannabinoid không hoạt động tâm thần, cannabidiol (CBD), cho thấy kết quả đầy hứa hẹn như một loại thuốc chống động kinh tiềm năng hiệu quả trong một số dạng động kinh chịu lửa. Để làm sáng tỏ các cơ chế mà CBD thực hiện các tác dụng chống động kinh của nó, chúng tôi đã nghiên cứu các tác động của nó tại các kết nối synap và trên các thuộc tính màng bên trong của các tế bào hình chóp CA1 hippocampal và hai tế bào ức chế chính: spiking nhanh, parvalbumin (PV) cholecystokinin (CCK) biểu hiện nội bào. Chúng tôi cũng đã điều tra xem liệu điều trị in vivo với CBD có làm thay đổi số phận của CCK và PV inteuron sử dụng hóa mô miễn dịch hay không.

Bạn đang xem bài viết:

---------- Các bài viết liên quan khác -----

Tiếp cận để thử nghiệm

Ghi lại toàn bộ tế bào điện sinh lý tế bào combined kết hợp với phẫu thuật thần kinh đã được thực hiện trong các lát não cấp tính của bệnh động kinh thùy thái dương ở in vivo (gây ra bởi axit kainic) và in vitro (gây ra bởi giải pháp động kinh Mg 2+ ). Đối với các thí nghiệm hóa mô miễn dịch, CBD đã được sử dụng in vivo (100 mg · kg 1 ) tại thời điểm 0 và 90 phút sau động kinh trạng thái, gây ra bởi axit kainic.

Kết quả chính

Ứng dụng tắm của CBD (10 μM) làm giảm tính dễ bị kích thích ở các khớp thần kinh đơn nhất giữa các tế bào hình chóp nhưng tăng cường tiềm năng synap ức chế được khơi gợi bằng cách đạp nhanh và thích nghi với các tế bào hình chóp sau synap. Hơn nữa, CBD phục hồi tính dễ bị kích thích màng tế bào của các tế bào PV, CCK và kim tự tháp theo cách thức cụ thể của loại tế bào. Những tác dụng bảo vệ thần kinh của CBD đã được chứng thực bằng các thí nghiệm hóa mô miễn dịch cho thấy giảm đáng kể tình trạng teo và tử vong của PV‐ và CCK ‐ biểu hiện nội mạc sau điều trị CBD.

Kết luận và hiệu quả

Dữ liệu của chúng tôi cho thấy rằng CBD khôi phục tính dễ bị kích thích và suy giảm hình thái trong các mô hình động kinh để kiểm soát mức độ động kinh trước thông qua nhiều cơ chế để phục hồi chức năng mạng bình thường.

Các từ viết tắt

ACSFCSF nhân tạoAMPAα ‐ amino ‐ 3 ‐ hydroxy 5 ‐ methyl ‐ 4 ‐ isoxazolepropionic acidCB 1loại cannabinoid ‐ 1Trung tâmcần saCCKcholecystokininDGngà răngFSđi xe đạp nhanhCTNHchiều rộng ở một nửa biên độKAaxit kainicPFAparaformaldehydPPRtỷ lệ xung ghépPVparvalbuminRTtăng thời gianSCATài sản thế chấp Schaffer ‐ liên quanSEđộng kinh trạng tháiSEPSPEPSP tự phátsIPSPIPSP tự phátTBS TTriton X 100 trong dung dịch muối Tris ‐TLEđộng kinh thùy thái dươngTRPVvanilloid thụ thể tạm thờiĐi đến:

Giới thiệu

Động kinh thùy tạm thời (TLE) là loại phụ của bệnh động kinh phổ biến nhất ở bệnh nhân người (Wiebe, 2000 ) dẫn đến những thay đổi bệnh lý rập khuôn bao gồm cả nguyên nhân phổ biến của bệnh xơ cứng vùng đồi thị. TLE có thể được kiểm tra trong một loạt các mô hình TLE động vật, không giống như các bệnh động kinh khác ở người (Kandratavicius et al., 2014 ; Levesque et al., 2016 ). Các yếu tố như chết tế bào, phát sinh thần kinh và tái tổ chức mạch thần kinh đã được quy là nguyên nhân của quá trình bệnh (Alexander et al., 2016), cũng như một giả thuyết nổi bật kéo dài về nguyên nhân chính gây ra bệnh động kinh – bất thường kênh ion. Mặc dù khiếm khuyết kênh ion có thể giải thích sự khởi đầu của các sự kiện động kinh, nhưng trong mọi trường hợp, chúng không mô tả các thay đổi sinh lý xảy ra trong giai đoạn tiềm ẩn của bệnh động kinh – quá trình não bộ phát triển bệnh động kinh. Việc cân bằng các sự kiện tế bào được thực hiện bởi các tế bào hình chóp kích thích và ức chế chuyên biệt http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/LigandDisplayForward?ligandId=1067 tế bào thần kinh chiếm khoảng 10% 15% tế bào thần kinh vỏ não (Ascoli et al., 2008 ) , và người ta thường chấp nhận rằng sự lây lan của dịch tiết động kinh liên quan đến rối loạn chức năng chính của khối nội tạng (Buhl et al., 1996; Hoàng tử và cộng sự, 1997 ; DeFelipe, 1999 ; Bausch, 2005 ). Số phận của các inteuron phụ thuộc vào kiểu phụ, và các vai trò đa dạng mà các inteuron đóng trong bệnh động kinh đang trở nên rõ ràng hơn; ví dụ, mẫn cảm co giật là rõ ràng ở những bệnh nhân bị giảm mạch ức chế (Wittner et al., 2005 ; Liu et al., 2014 ).

Một số nghiên cứu báo cáo sự mất các chất ức chế hồi hải mã trong các mô hình động vật gặm nhấm (Cavazos et al., 1994 ; Fritschy et al., 1999 ; Bouilleret et al., 2000 ; Gorter et al., 2001 ), cũng như trong bệnh động kinh ở người bệnh nhân (Andrioli và cộng sự, 2007 ). Những quan sát này được chứng thực thêm bằng các nghiên cứu di truyền sử dụng chuột biến đổi gen thiếu nội tạng cho thấy khiếm khuyết gen đặc biệt ảnh hưởng đến sự phát triển nội tạng cụ thể, dẫn đến co giật (Jones Davies et al ., 2009). Nhìn chung, các nghiên cứu này cho thấy việc mất các khối nội tạng có tác động tiêu cực đến sự cân bằng của mạch thần kinh tổng thể, đã bị thách thức bởi các nhóm nghiên cứu khác cho rằng mất nội tạng cụ thể dẫn đến việc bảo tồn các mạch ức chế bên (Buckmaster và Jongen‐ Relo, 1999 ). Do đó, có vẻ như số phận của các khối nội tạng trong não động kinh, đặc biệt là đồi hải mã, vẫn còn phần lớn mơ hồ và chưa được giải quyết.

Hiện nay, thiếu phương pháp điều trị hiệu quả để ngăn chặn sự tiến triển của bệnh động kinh, điều này phức tạp hơn với sự phát triển của dược lý đối với các thuốc chống động kinh thông thường. Do đó, điều trị hiệu quả tất cả các loại động kinh là một vấn đề chưa được giải quyết trong lĩnh vực này, dẫn đến tỷ lệ kiểm soát động kinh thất bại / không đầy đủ ở bệnh nhân động kinh cao hơn; do đó, cần tiếp tục hiểu rõ hơn về những thay đổi tế bào của bệnh động kinh và bệnh động kinh, cũng như thuốc chống động kinh hiệu quả hơn và được dung nạp tốt hơn với cơ chế hoạt động được xác định rõ hơn.

Một lĩnh vực đặc biệt được các nhà nghiên cứu và bác sĩ lâm sàng quan tâm gần đây là việc sử dụng tiềm năng của các phytocannabinoids không hoạt động như http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/LigandDisplayForward?ligandId=4150 ) hoặc tương tự của nó. Hill và cộng sự, 2012a ; Bialer et al., 2015 ), trong điều trị bệnh động kinh, đặc biệt là các dạng kháng thuốc, kháng thuốc hơn (Ibeas Bih et al., 2015 ; Devinsky et al., 2017 ; Gaston và Friedman, 2017 ).

Nghiên cứu trước đây đã chỉ ra rằng CBD có thể làm giảm hoạt động epileptiform vùng đồi thị trong cả in vitro và in vivo mô hình động vật, mà không có tác dụng phụ thần gắn liền với phytocannabinoids khác (ví dụ http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/LigandDisplayForward?ligandId=2424 , Δ 9 ‐THC) hoạt động thông qua các loại thụ thể cannabinoid ‐ 1 ( http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/ObjectDisplayForward?objectId=56 ) thụ thể (Consroe và Wolkin, 1977 ; Consroe et al., 1982 ; 2007 ; Jones và cộng sự, 2010 ; 2012), làm cho hệ thống cannabinoid trở thành mục tiêu điều trị thú vị và mới lạ cho bệnh động kinh. Những quan sát này đã được chứng thực bởi các nghiên cứu lâm sàng ở người gần đây, trong đó CBD giảm 50% tần số động kinh co giật, mang lại hy vọng cho các nhóm bệnh nhân mắc chứng động kinh không kiểm soát được khi các phương pháp điều trị bằng thuốc khác đã thất bại, cụ thể là trong một rối loạn động kinh ở trẻ em phức tạp liên quan đến tỷ lệ tử vong cao. , Hội chứng Dravet (Devinsky et al., 2017 ). Hội chứng này có liên quan đến các đột biến kênh natri có thể có tác dụng cụ thể đối với nội mạc, làm giảm tính hưng phấn nội tạng.

Like most antiepileptic drugs, CBD is thought to have multiple targets, and further investigations are clearly required to elucidate the cellular mechanisms through which CBD exerts its anti‐seizure effects as well as any possible neuroprotectant activity. Studying single channels does not inform us about whether a drug would decrease the excitation of interneurons or pyramidal cells; for example, we know that antiepileptic drugs such as sodium channel blockers affect both excitation and inhibition that can worsen epilepsy when there is a deficit in interneuronal excitability as in Dravet’s syndrome (Rubinstein et al., 2015). Therefore, we have taken an alternative, novel approach and addressed the functional impact of CBD treatment on excitatory and inhibitory local circuits in epilepsy. Our general hypothesis is that the intrinsic membrane properties of pyramidal cells and the two major subclasses of interneurons: fast spiking (FS), parvalbumin (PV)‐expressing and adapting, cholecystokinin (CCK)‐expressing interneurons are altered, leading to impaired local circuit activity in the hippocampus during epilepsy, and that the activity of these cells and their local circuit function will be restored by CBD, due to a neuroprotective effect. Using electrophysiological techniques, we initially investigated whether CBD could alter the epilepsy‐induced synaptic and biophysical properties of pyramidal cells, PV‐ and CCK‐expressing interneurons, in an established rodent model of epilepsy. We then investigated whether CBD treatment could alter the fate of these two major interneuron types in the epileptic brain using anatomical studies.Đi đến:

Phương pháp

Động vật

Các nghiên cứu trên động vật được báo cáo tuân thủ các hướng dẫn ARRIVE (Kilkenny và cộng sự , 2010 ; McGrath và Lilley, 2015 ). Tất cả các thí nghiệm được thực hiện theo các quy định của Văn phòng tại nhà của Anh theo Đạo luật Quy trình khoa học động vật 1986. Giấy phép dự án Home Office do PI (AA: PPL số 7007558) nắm giữ và được phê duyệt bởi các hội đồng đánh giá đạo đức bên trong và bên ngoài. Chuột đực trưởng thành Sprague trên Dawley, giữa ngày sau sinh 42 và 56 và nặng từ 200 đến 250 g, được sử dụng trong nghiên cứu này. Tất cả các động vật được nuôi trong một chu kỳ tối 12 giờ, với thức ăn và nước uống quảng cáo có sẵn .

Mô hình động kinh

Hai mô hình động kinh đã được sử dụng, in vivo kainic acid (KA) gây ra chứng động kinh và một mô hình cắt lát não hippocampal in vitro Mg 2+ (xem bên dưới). Đối với mô hình KA, động vật được điều trị động kinh bằng cách tiêm KA ip duy nhất, với liều 10 mg · kg 1 (Ben ‐ Ari và Cossart, 2000 ). Mức độ nghiêm trọng của các cơn động kinh được ghi bằng Racine ( năm 1972) quy mô và co giật của lớp 5 (tức là nuôi, clonus hai chân trước và ngã khi mất kiểm soát tư thế) đã được chấp nhận. Bắt đầu co giật tự phát xảy ra trong khoảng từ 30 đến 100 phút sau khi tiêm KA. Các động vật được theo dõi thêm cho đến khi sự phát triển đầy đủ của tình trạng động kinh (SE). Để giảm thiểu tỷ lệ tử vong liên quan đến SE, các cơn động kinh kéo dài đã được chấm dứt bằng một mũi tiêm http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/LigandDisplayForward?ligandId=3364với liều 10 mg kg ‐ 1, ip, theo yêu cầu của quy định của Home Office. Thời gian của SE được đo dựa trên các biểu hiện hành vi và khởi phát SE được coi là xảy ra khi chuột bị co giật toàn bộ động cơ do mất kiểm soát tư thế và ngã. Chuột được duy trì thêm 2 tuần sau tiêm ‐ KA để đảm bảo sự phát triển của các cơn động kinh tự phát, trước khi sử dụng chúng cho các thí nghiệm điện sinh lý trong ống nghiệm hoặc cho các nghiên cứu về thần kinh.

Đối với các nghiên cứu về thần kinh, chuột được phân ngẫu nhiên vào một trong bốn nhóm thử nghiệm: (i) kiểm soát sức khỏen = 5 chuột); (ii) epileptic_vehicle [tiêm một lần xe (10% DMSO / nước muối), trong khoảng thời gian 2 tuần sau SE khởi phát, n = 6 chuột]; (iii) CBD_time 0 [đơn tiêm 100 mg · kg -1 CBD (Tocris Bioscience, Vương quốc Anh), khoảng không gian của SE khởi đầu, n = 6 con chuột]; và (iv) CBD_time 90 (liều tiêm duy nhất 100 mg · kg -1 CBD, 90 phút khoảng thời gian sau khi SE khởi đầu, n = 6). Các chất được tiêm ip Liều CBD được tiêm vào chuột xấp xỉ ED 50đối với các mô hình động kinh ở Viện nghiên cứu rối loạn thần kinh và đột quỵ quốc gia (Jones và cộng sự, 2010 ).

Tất cả những con chuột bị gây mê qua hít phải khí của http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/LigandDisplayForward?ligandId=2401 (Fluothane) tiếp theo là natri tiêm phenobarbital (60 mg · kg -1 , ip) cho các nghiên cứu điện sinh lý và neuroanatomical. Mức độ gây mê được theo dõi bằng cách sử dụng bàn đạp, phản xạ véo đuôi, tốc độ, độ sâu và mô hình hô hấp thông qua quan sát và màu sắc của màng nhầy và da.

Điện sinh lý để ghi trong ống nghiệm

Chuột được gây mê và tưới máu bằng dung dịch CSF nhân tạo (ACSF) chứa sucrose bao gồm các chất sau (tính bằng mM): 248 sucrose, 3,3 KCl, 1,4 NaH 2 PO 4 , 2,5 CaCl 2 , 1,2 MgCl 2 , 15 glucose và 25,5 NaHCO 3 , sủi bọt với 95% O 2 và 5% CO 2 . Sau khi chặt đầu và cắt bỏ não, các lát vỏ não, dày 300 μm, được cắt trong ACSF lạnh bằng băng bằng máy rung tự động (Leica, Đức). ACSF tiêu chuẩn này chứa (tính bằng mM) như sau: 121 NaCl, 2,5 KCl, 1,3 NaH 2 PO 4 , 2 CaCl 2 , 1 MgCl 2 , 20 glucose và 26 NaHCO 3, cân bằng với 95% O 2 và 5% CO 2 . Cắt lớp não được đặt trong một buồng ngập nước và siêu tưới máu với ACSF với tốc độ 1-2 ml · phút -1 trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng (20-23 ° C) trước khi ghi âm. Để tạo ra mô hình động kinh không có in vitro Mg 2+ , các lát não được ủ trong oxy (95% O 2, 5% CO 2 ) ACSF, chứa (trong mM) 121 NaCl, 2,5 KCl, 1,25 NaH 2 PO 4 , 2 CaCl 2 , 26 NaHCO 3 và 20 glucose, trong khoảng 2 giờ.

Các bản ghi soma toàn bộ tế bào được ghép nối đã thu được giữa các tế bào hình chóp CA1 (đối với các kết nối kích thích) và giữa các tế bào nội mô và các tế bào hình chóp sau synap (đối với các kết nối ức chế). Các điện cực miếng vá có điện trở 8 Máy11 MΩ được chế tạo từ các mao mạch thủy tinh borosilicate dạng sợi (Bộ máy Harvard, Anh) và chứa đầy dung dịch chứa (tính bằng mM): 134 K gluconate, 10 HEPES, 10 phosphocreatine, 2 Na 2 ATP, 0,2 Na 2 GTP và 0,2% w   v -1biocytin. Các tế bào thần kinh đã được chọn để ghi lại dựa trên hình dạng của soma của chúng bằng kính hiển vi video dưới ánh sáng tương phản nhiễu khác biệt hồng ngoại và được đặc trưng thêm bởi các đặc tính điện sinh lý của chúng thu được từ một loạt xung 500 cực khử cực và siêu phân cực. Các tham số tiềm năng hành động được đo lường từ các phản ứng của việc khử cực các bước hiện tại (+ 50 5015050 pA, 500 ms), điều này tạo ra một hoặc các chuyến tàu tiềm năng hành động. Điện trở đầu vào và hằng số thời gian màng được xác định từ các thay đổi điện áp để đáp ứng với các bước hiện tại siêu phân cực (−100 pA, 500 ms).

Các EPSP hoặc IPSP đơn nhất được gợi ra bằng một bước khử cực vào tế bào thần kinh tiền synap (+0,05 nA, 5 thép10 ms) lặp lại ở 0,33 Hz. PSP tự phát được ghi nhận từ các tế bào được giữ thường xuyên ở điện thế màng −55 mV bằng cách tiêm dòng khử cực ổn định. Các bản ghi được thực hiện ở chế độ hoạt động kẹp hiện tại (bộ khuếch đại npi SEC 05LX; điện tử npi, Đức), thông thấp được lọc ở mức 2 KHz và được số hóa ở mức 5 KHz bằng giao diện CED 1401 (Cambridge Electronic Design, UK). Điện trở đầu vào được theo dõi trong suốt các thí nghiệm bằng bước siêu phân cực (−0,001 nA, 10 ms). Tín hiệu (Thiết kế điện tử Cambridge) đã được sử dụng để thu được các bản ghi và tạo các bước hiện tại. Biên độ EPSP / IPSP cao nhất, 10 phép đo thời gian tăng (RT) 10% 90% và độ rộng ở các phép đo biên độ (CT) một nửa được lấy từ mức trung bình bao gồm 100 sự kiện synap đơn nhất 100200200. Thất bại rõ ràng của truyền được gán giá trị 0 mV và không được tính vào mức trung bình.

Đối với các nghiên cứu dược lý in vitro , các thuốc như CBD (5, 8 và 10 M) và thuốc đối kháng chọn lọc của thụ thể CB 1 AM4113 (1 μM; Tocris Bioscience) đã được áp dụng.

Hóa mô miễn dịch

Sau khi gây mê, tưới máu nội sọ đã được thực hiện, với PBS, sau đó là dung dịch paraformaldehyd (PFA) 4% trong PBS 0,1 M, pH 7,4 (200 ml . 100 g 1 trọng lượng cơ thể). Các con vật sau đó bị chặt đầu, và bộ não nhanh chóng được lấy ra và cố định trong dung dịch chứa 4% w  v  1 PFA, 0,025% v   v -1 glutaraldehyde, 0,2% v   v  -1axit picric trong 0,1 M PBS, qua đêm. Các phần não coron dày 100 μm được cắt bằng máy rung (Vibroslice, Camden Cụ, Loughborough, UK) và rửa trong 0,1% Triton X 100 trong TBS (TBS T), sau đó ủ trong dung dịch nước 1% hydro peroxide 30 phút. Sau khi rửa thêm trong TBS ‐ T, các phần được ủ trong PBS chứa 10% huyết thanh dê bình thường (Sigma ‐ Aldrich, Hoa Kỳ) trong 1 giờ ở nhiệt độ phòng. Điều này tiếp theo được ủ trong dung dịch kháng thể chính, chứa kháng thể kháng PV pha loãng 1: 5000 được nuôi ở thỏ (SWANT, UK) hoặc kháng thể kháng CCK pha loãng 1:10 000 được nuôi trong chuột (quà tặng từ Gordon O Breath, Cure, UCLA) và Huyết thanh ngựa 1% trong TBS ‐ T, trong 24 giờ ở 4 ° C. Sau khi rửa trong TBS T, các phần này sau đó được ủ trong các kháng thể chống chuột hoặc chuột chống biotin thứ cấp được nuôi trong dê (Vector Laboratory Laboratory, UK), pha loãng ở 1: 500 trong 24 giờ ở 4 ° C. Điều này tiếp theo rửa trong TBS T và ủ thêm trong dung dịch avidin ‐ biotin ‐ horseradish peroxidase (Vector Laboratory Laboratory), trong 2 giờ ở nhiệt độ phòng. Các phần sau đó được rửa thêm trong TBS T và được xử lý cho 3‐3 diaminobenzidine và sau đó được khử nước và gắn kết (xem Ali,2007 ).

Tái thiết các tế bào thần kinh miễn dịch và phân tích

Các bản đồ giải phẫu của somata miễn dịch của các tế bào thần kinh PV và CCK trong sự hình thành vùng đồi thị được vẽ thủ công từ ba phần dày 100 μm liên tiếp bằng cách sử dụng ống vẽ gắn với kính hiển vi DMR Leica dưới độ phóng đại × 10; các hình ảnh được quét và số hóa để xếp chồng các phần 300 mm để thực hiện phân tích mật độ tế bào bằng phần mềm, Image J (phiên bản 1.49, RBS, Maryland, USA). Các inteuron biểu hiện PV‐ và CCK được tái tạo bằng cách sử dụng ống vẽ kết nối với kính hiển vi Leica DMR với vật kính × 40 để điều tra các thay đổi về mặt giải phẫu và phân tích Sholl. Chỉ có các dấu phẩy hoàn chỉnh, được tẩm đầy đủ mà không có sự cắt cụt rõ ràng của các nhánh đuôi gai được đưa vào nghiên cứu này. Phân tích Sholl được thực hiện trên các hình ảnh được xây dựng lại bằng cách sử dụng một khuôn mẫu được tạo sẵn trong Image J với kích thước bước bán kính là 10 m.et al., 2006 ).

Phân tích thống kê

Dữ liệu và phân tích thống kê tuân thủ các khuyến nghị về thiết kế và phân tích thử nghiệm trong dược lý học (Curtis et al ., 2015 ). Tất cả các giá trị dữ liệu được đưa ra dưới dạng trung bình ± SD, trừ khi có quy định khác. Của học sinh hai đuôi, kết hợp t -test được sử dụng để so sánh hai nhóm dữ liệu. Để so sánh giữa hơn hai nhóm dữ liệu, thử nghiệm thống kê ANOVA một chiều đã được sử dụng, tiếp theo là thử nghiệm Tukey post . Tất cả các phân tích thống kê được thực hiện bằng gói thống kê Origin Pro 2016 SR1. Ý nghĩa thống kê được chấp nhận khi P <0,05. Các giá trị ‘ n ‘ đại diện cho số lượng quan sát và số lượng động vật được sử dụng, trừ khi có quy định khác.

Danh pháp của mục tiêu và phối tử

Các mục tiêu và phối tử protein chính trong bài viết này được liên kết với các mục tương ứng trong http://www.guidetopharma-cology.org , cổng thông tin chung cho dữ liệu từ Hướng dẫn IUPHAR / BPS về PHARMACITALY (Harding et al., 2018 ), và là được lưu trữ vĩnh viễn trong Hướng dẫn ngắn gọn về DƯỢC LIỆU 2017/18 (Alexander và cộng sự, 2017 a , b , c ).Đi đến:

Các kết quả

Nghiên cứu này ban đầu tập trung vào nghiên cứu ảnh hưởng của CBD đến các đặc tính khớp thần kinh và sinh lý của tế bào thần kinh, sau đó là điều tra về thần kinh trong trường hợp vùng đồi thị CA1.

CBD thay đổi các kết nối synap đơn nhất, giúp giảm hoạt động co giật

Để điều tra xem liệu CBD có làm thay đổi các sự kiện synap đơn nhất hay không, trước tiên chúng tôi đã nghiên cứu các kết nối kích thích đơn nhất giữa hai tế bào hình chóp và sau đó sự ức chế được gợi ra bởi các tế bào FS, PV và các tế bào CCK thích nghi trước synap trên các tế bào hình chóp sau synap trong vùng đồi thị CA1. Có nhiều lớp con khác nhau của các tế bào CCK thích ứng trong CA1; chúng tôi tập trung vào các nội hàm của tài sản thế chấp Schaffer (SCA) có rất nhiều trong CA1 (Ali, 2007 ). Tất cả các phân nhóm interneuron đã được xác nhận về mặt giải phẫu.

CBD làm giảm kích thích tại các tế bào hình chóp

Các thí nghiệm ban đầu đã được thực hiện để đánh giá tác động của CBD đối với các EPSP tự phát (sEPSPs; Hình 1A). Tần số và biên độ trung bình của các sEPSP được ghi nhận ở điện thế màng −60 mV trong kiểm soát khỏe mạnh và mô động kinh gây ra bởi KA là 0,52 ± 0,23 Hz (0,57 ± 0,83 mV ở biên độ, n = 5 tế bào hình chóp, n = 3 động vật) 1,74 ± 0,54 Hz (biên độ 1,62 ± 0,96 mV, n = 5 tế bào hình chóp, n = 3 động vật) tương ứng. Chỉ có sự giảm đáng kể về tần số và biên độ sEPSP được quan sát thấy với ứng dụng CBD tắm 10 μM, đã khôi phục các thuộc tính sEPSP để kiểm soát mức khỏe mạnh 0,55 ± 0,42 Hz (0,86 ± 0,71 mV, P <0,05, n = 5; 1A).

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v ... Tên đối tượng là BPH-175-2097-g001.jpg

Hình 1

CBD làm giảm kích thích. (A) Các EPSP tự phát, được ghi nhận ở điện thế màng −60 mV trong mô kiểm soát khỏe mạnh và mô hình KA của mô động kinh. Nồng độ 5, 8 và 10 μM CBD đã được áp dụng. Tần số sEPSP và biên độ cực đại chỉ thay đổi đáng kể với 10 μM CBD. (B) Ghi đơn vị giữa hai tế bào hình chóp được kết nối đồng bộ. Ba tiềm năng hành động tiền synap được gợi ra bởi tế bào hình chóp dẫn đến các EPSP hiển thị trầm cảm synap được ghi nhận ở ba tiềm năng màng khác nhau (−70, −60 và −55 mV). Các EPSP này đã giảm biên độ và thời gian sau khi sử dụng 10 μΜ CBD (dấu vết màu đỏ). (C, D) Âm mưu thay đổi biên độ trung bình cao nhất của EPSP trên mỗi kết nối synap ( n = 5) với ứng dụng tắm CBD được ghi nhận ở −55 và −70 mV. CBD đã có một hành động rõ rệt hơn ở các tiềm năng màng tích cực hơn. (E) Âm mưu của PPR (EPSP biên độ thứ hai / EPSP biên độ thứ nhất) ở −55 và −70 mV; không có thay đổi đáng kể về PPR được đo trong các tế bào được xử lý CBD.

Đối với các kết nối đơn nhất, xác suất tìm thấy hai ô hình chóp CA1 được kết nối đồng bộ là thấp. Chỉ một trong 12 cặp tế bào hình chóp được thử nghiệm mang lại kết nối synap. Chúng tôi thấy rằng CBD đã thực hiện hành động của mình tại các khớp thần kinh kích thích đơn nhất bằng cách giảm biên độ của các EPSP (Hình 1B). Các EPSP được gợi ra trong các tế bào hình chóp kích thích bởi các tế bào hình chóp khác đã giảm ( n = 5). Biên độ và thời gian EPSP đều giảm ở tất cả các tiềm năng màng sau synap. Tuy nhiên, ảnh hưởng của CBD rõ rệt hơn ở điện thế màng khử cực (−55 mV), giảm biên độ đáng kể từ 2,75 ± 1,40 mV (kiểm soát) xuống 0,62 ± 0,31 mV sau khi áp dụng tắm CBD 10 μM ( n = 5, P < 0,05). So sánh, ở điện thế màng sau synap âm hơn −70 mV, sự thay đổi trung bình của biên độ đã giảm từ 3,33 ± 2,10 xuống 2,48 ± 1,90 mV với ứng dụng CBD ( n = 5, P> 0,05). Điều này cho thấy rằng các EPSP được gợi ra tại các tế bào hình chóp sau synap bị ảnh hưởng đáng kể bởi CBD ở mức độ kích thích khử cực nhiều hơn. Các kết nối synap thường có mối quan hệ điện áp không thông thường trong nghiên cứu hiện tại (Hình 1Bẻ D), trong đó biên độ EPSP giảm ở biên độ cực đại từ điện thế giữ −70 xuống −60 mV; tuy nhiên, ngoài một màng chứa tiềm năng −58 mV, EPSP tăng về biên độ và thời gian. Các kết nối này cũng thường hiển thị trầm cảm synap, được biểu thị bằng tỷ lệ xung trung bình (PPR) (biên độ EPSP thứ hai / biên độ ‐ EPSP thứ nhất) ở −55 mV, 0,25 ± 0,13 ( n = 5), không thay đổi đáng kể với ứng dụng tắm của CBD, 0,32 ± 0,17 (Hình 1E), đề xuất một cơ chế hành động postynaptic. CBD đã không thay đổi đáng kể EPSP RT hoặc thời lượng ở cả hai tiềm năng màng, nằm trong khoảng 2,5 và 3,5 ms và 14 và 21 ms tương ứng.

Ức chế tăng cường

Trái ngược với sự kích thích, các IPSP tự phát (sIPSP) được ghi lại trong các tế bào hình chóp và IPSP đơn nhất được gợi ra bởi FS và các tế bào CCK (SCA) thích nghi trên các tế bào hình chóp sau synap được giữ ở −55 mV đều được tăng cường bằng ứng dụng tắm CBD (Hình 2A). Biên độ và tần số sIPSP trung bình được tăng thêm 45 ± 7,8 và 38,5 ± 10%, trong các giá trị điều khiển với ứng dụng tắm tương ứng 10 μM CBD ( n = 4 tế bào hình chóp sau synap, n = 3 động vật). Những sự kiện này không thay đổi với ứng dụng tắm tiếp theo của chất đối kháng chọn lọc của thụ thể CB 1 , AM41131 (1 μM), được hiển thị trong Hình 2A.

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v ... Tên đối tượng là BPH-175-2097-g002.jpg

Mở trong một cửa sổ riêngHình 2

CBD tăng cường ức chế. (A, bảng i, ii) sIPSP, được ghi nhận ở điện thế màng −55 mV. Tần số và biên độ cực đại của sIPSP tăng với CBD (10 M) và không thay đổi khi bổ sung thêm CB 1 chọn lọcchất đối kháng thụ thể AM4113 (1 μM). (B, bảng i, ii) Kết nối đơn nhất giữa một PV FS tiền ung thư có chứa inteuron (FS ‐ PV) và một tế bào kích thích sau synap được hiển thị. IPSP trung bình được hiển thị dưới dạng dấu vết màu đen (trong tầm kiểm soát) và sau khi tắm ứng dụng 10 CBM CBD (20 phút30 phút, dấu vết màu đỏ). (B, bảng i, ii.) IPSP được gợi ý bởi CCK, SCA interneuron trên các tế bào hình chóp sau synap. Các dấu vết trên cùng trong (A) và (B) bên trái cho thấy các IPSP trung bình được gợi ra bởi một tiềm năng hành động trước khi sinh, trong khi bảng dưới cùng cho thấy sự ức chế được khơi gợi bởi một tiềm năng hành động của tiền giả định; kết quả là có sự tổng kết của sự kiện ức chế. (C, bảng i, – ii) Các sơ đồ cho thấy sự thay đổi trung bình về biên độ IPSP, IPSP RT và chiều rộng ở một nửa biên độ được gợi ra bởi FS ‐ PV và CCK, SCA tiền ung thư tiền ung thư lên các tế bào hình chóp với ứng dụng CBD tắm. Các sơ đồ đường cho thấy sự thay đổi về biên độ IPSP trung bình cực đại với CBD trên mỗi kết nối synap riêng lẻ.

Các IPSP đơn nhất được gợi ra bởi các tế bào FS hiển thị RT nhanh (Hình 2B, panen i iii iii; 10 phạm vi RT90% RT, 7 trận10 ms; Phạm vi CTNH; 30 Ném51 ms), với biên độ cực đại trung bình là 1,06 ± 0,56 mV ( n = 4). Biên độ này tăng lên 1,93 ± 1,04 mV và do đó tăng 182% biên độ điều khiển với ứng dụng CBD ( n = 4).

Các IPSP được gợi ra bằng cách điều chỉnh các tế bào SCA hiển thị các RT chậm hơn (phạm vi 10 909090% RT, 8 mật11 ms; phạm vi CTNH; 40 mật65 ms; xem Hình 2C, panen i iii iii). Biên độ đỉnh trung bình là 1,37 ± 0,76 mV ( n = 6), cũng được tăng cường lên 2,09 ± 0,98 mV biên độ điều khiển bởi CBD, tăng đáng kể 150 ± 25% kiểm soát ( n = 6, P <0,05).

CBD tạo ra một loại tế bào thay đổi đặc tính tính chất màng của tế bào thần kinh CA1

Các thuộc tính màng nội tại của tế bào thần kinh tiết lộ thông tin về cách một tế bào sẽ chuyển tiếp thông tin trong mạng. Nó cũng được ghi nhận rằng các tế bào hình chóp chính cho thấy sự hiếu động trong mô động kinh; do đó, chúng tôi đã nghiên cứu các đặc tính màng bên trong của FS (PV), thích nghi (CCK) và các tế bào hình chóp ở chuột khỏe mạnh và trong hai mô hình động kinh khác nhau: mô hình KA in vivo của bệnh động kinh và mô hình cắt não in vitro Mg 2+ (xem bảng 1cho dữ liệu định lượng và ý nghĩa thống kê). Trong mô hình KA của bệnh động kinh, cả ba loại tế bào đều bị ảnh hưởng đáng kể về tính chất màng của chúng, cho thấy mức độ nghiêm trọng của mô hình này trong việc tái cấu trúc TLE ở người.

Bảng 1

Đặc tính điện sinh lý của kiểm soát khỏe mạnh, các tế bào vùng đồi thị động kinh do Mg 2+ và KA gây ra trong điều trị CBD

Chuột kiểm soát sức khỏe
Các tế bào hình chóp ( n = 13)Các tế bào thích ứng ( n = 11)Các tế bào FS ( n = 9)
Phân lớp tế bàoĐiều khiểnTrung tâmĐiều khiểnTrung tâmĐiều khiểnTrung tâm
AP AP (mV)76,02 ± 2,2473,60 ± 1,7781,45 ± 2,5184,62 ± 6,2371,66 ± 1,2370,45 ± 2,02
AP CT (ms)1,83 ± 0,073,35 ± 1,561,43 ± 0,141,52 ± 0,151,28 ± 0,161,28 ± 0,16
Ngưỡng AP (mV)26,11 ± 1,7627,59 ± 2,9820,96 ± 2,0423,84 ± 2,7226,15 ± 3,4318,72 ± 1,37 *
AP AHP Ampe (mV)4,94 ± 0,805,47 ± 0,876,40 ± 0,596,50 ± 0,7411,50 ± 0,8212,02 ± 0,47
Điện trở đầu vào (MΩ)290,08 ± 15,75241,21 ± 14.10 *305,42 ± 35,11245,21 ± 29,62 *289,60 ± 38,00396,84 ± 52,64 *
TC (ms)13,58 ± 1,9010,42 ± 0,36 *12,82 ± 1,2411,47 ± 0,82 *10,06 ± 0,4414,23 ± 0,49 *
Số gai ở +150 pA8,90 ± 0,615,40 ± 0,35 *12,09 ± 1,066,45 ± 0,76 *15,50 ± 2,8822,25 ± 2,96 **

Mở trong một cửa sổ riêng

Mô hình động kinh tự do Mg 2+
Các tế bào hình chóp ( n = 5)Các tế bào thích ứng ( n = 5)Các tế bào FS ( n = 4)
Phân lớp tế bàoĐiều khiểnTrung tâmĐiều khiểnTrung tâmĐiều khiểnTrung tâm
AP AP (mV)78,36 ± 3,4176,93 ± 3,8388,26 ± 6,4271,75 ± 18,7175,54 ± 9,8372,33 ± 8,27
AP CT (ms)2,01 ± 0,182,20 ± 0,381,22 ± 0,161,32 ± 0,141,58 ± 0,431,52 ± 0,41
Ngưỡng AP (mV)24,80 ± 1,8325,80 ± 2,9925,85 ± 1,5421,27 ± 5,5828,70 ± 5,8021,24 ± 2,55
AP AHP Ampe (mV)6,05 ± 0,745,37 ± 0,486,54 ± 0,836.05 ± 1.742,64 ± 1,294,49 ± 1,95
Điện trở đầu vào (MΩ)308 ± 16,55227,60 ± 21,35 *289,06 ± 36,67244,92 ± 37,83 *351,45 ± 46,36396,20 ± 65,74
TC (ms)14,06 ± 1,2310,03 ± 0,68 *8,28 ± 1,738,74 ± 0,728,75 ± 0,6012,08 ± 0,63
Số gai ở +150 pA12,80 ± 1,204,25 ± 0,22 *10,20 ± 0,664,60 ± 0,51 *10,75 ± 1,4917,75 ± 2,87

Mở trong một cửa sổ riêng

Mô hình động kinh gây ra KA
Các tế bào hình chóp ( n = 12)Các tế bào thích ứng ( n = 12)Các tế bào FS ( n = 7)
Phân lớp tế bàoĐiều khiểnTrung tâmĐiều khiểnTrung tâmĐiều khiểnTrung tâm
AP AP (mV)79,42 ± 2,8178,33 ± 2,5581,78 ± 3,3477,67 ± 1,6674,61 ± 2,3975,46 ± 2,41
AP CT (ms)2,14 ± 0,102,43 ± 0,181,59 ± 0,131,84 ± 0,111,34 ± 0,211,32 ± 0,18
Ngưỡng AP (mV)27,61 ± 2,6527,31 ± 3,5726,76 ± 2,8727,41 ± 2,7519,12 ± 1,6715,74 ± 1,85 *
AP AHP Ampe (mV)2,42 ± 0,252,46 ± 0,337,23 ± 1,704,62 ± 0,6412,00 ± 1,0910,59 ± 1,57
Điện trở đầu vào (MΩ)313,84 ± 25,44272,04 ± 25,42 *364,49 ± 43,35285,65 ± 43,12 *372,63 ± 43,55411,34 ± 51,50
TC (ms)14,98 ± 0,7410,58 ± 1,16 *10,25 ± 0,567,99 ± 0,42 *9,50 ± 0,8112,21 ± 0,77 *
Số gai ở +150 pA14,18 ± 0,284,92 ± 0,48 *12,36 ± 1,607,64 ± 1,23 *10,00 ± 0,7121,43 ± 3,21 *

Mở trong một cửa sổ riêng

AP, tiềm năng hành động; Ampe, biên độ; CTNH, nửa ‐ chiều rộng; AHP, sau siêu phân cực; TC, thời gian không đổi; FS, đạp xe nhanh.

Kết quả được biểu thị bằng trung bình ± SEM.P <0,05.

T ‐test cặp đôi của sinh viên đã được sử dụng để so sánh giữa điều kiện kiểm soát và điều trị CBD của các đặc tính sinh lý khác nhau của từng loại tế bào.

Các tế bào hình chóp chính hiển thị các đặc tính tiềm năng hành động thích ứng với động học chậm so với các quần thể tế bào thần kinh vùng đồi thị khác được nghiên cứu ở chuột kiểm soát khỏe mạnh (Bảng 1, Nhân vật 3). Sau 20 phút áp dụng CBD 10 MM, những thay đổi đáng kể về tính chất màng bên trong bao gồm giảm số lượng gai và giảm sức đề kháng đầu vào ở chuột kiểm soát khỏe mạnh (Hình 3). Nhìn chung, các tế bào hình chóp hippocampal đã bị kích thích ở cả mô hình KA in vivo và mô hình không có in vitro Mg 2+ , được chứng minh bằng số lần phóng điện tiềm năng hành động cao hơn và khả năng chống đầu vào tăng cường được ghi nhận ở tiềm năng màng cố định của – 60 mV (Hình 3D). Trong các mô hình này, ứng dụng tắm của CBD cũng dẫn đến những thay đổi đáng kể bằng cách giảm số lượng đột biến, điện trở đầu vào và hằng số thời gian của các ô. Một sự dịch chuyển sang phải của các đường cong đầu ra điều khiển đại diện cho số lượng gai được gợi ý chống lại việc tăng khử cực hiện tại (Hình 3A, bảng iii, B, bảng iii, C, bảng iii) chỉ ra sự triệt tiêu tính dễ bị kích thích gây ra bởi CBD trong các tế bào hình chóp. CBD gây ra sự gia tăng không đáng kể về ngưỡng tiềm năng hành động trung bình trong các tế bào hình chóp; Ngoài ra, tiềm năng tác động trung bình nửa ‐ chiều rộng, biên độ và tăng đột biến sau biên độ ‐ siêu phân cực (AHP) cho thấy không có sự khác biệt có ý nghĩa thống kê trong các nhóm thử nghiệm. Điều thú vị là, ứng dụng tắm của CBD cũng dẫn đến hiện tượng siêu phân cực 10 mV của điện thế màng.

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v ... Tên đối tượng là BPH-175-2097-g003.jpg

Mở trong một cửa sổ riêngHình 3

Thuộc tính màng siêu hoạt động của tế bào hình chóp được khôi phục bởi CBD. Các thuộc tính màng nội tại của các tế bào hình chóp được ghi nhận ở những con chuột khỏe mạnh trong điều khiển (A, bảng i) và (A, bảng ii) sau 10 application ứng dụng tắm CBD. Tương tự, các tế bào hình chóp ghi lại các lát não trong (B, bảng i), (B, bảng ii) Mg 2+ ‐free và từ (C, bảng i), (C, bảng ii) mô hình động kinh KA. Các đường cong đầu ra của đầu vào hiển thị mối quan hệ tuyến tính giả giữa số lượng gai được tạo bởi các tế bào hình chóp của (A, bảng iii) các loài gặm nhấm khỏe mạnh ( n = 13), (B.iii) Mg 2+ ‐free ( n = 5) và (C, bảng iii) KA ( n = 12) mô hình động kinh với tăng tiêm hiện tại. Việc bắn các tế bào hình chóp đã giảm sau khi áp dụng CBD. (D) Các ô vạch biểu thị tính chất màng bên trong của các tế bào hình chóp trong các mô hình động kinh Mg 2+ ‐free ( n = 5) và KA ( n = 12) so với các loài gặm nhấm khỏe mạnh ( n = 13). (D, bảng i) CBD không tạo ra thay đổi rõ ràng về ngưỡng tiềm năng hành động (AP) của các tế bào hình chóp. (D, bảng ii) Điện trở đầu vào và (D, bảng iii) hằng số thời gian đã giảm bởi CBD. Kết quả được biểu thị bằng trung bình ± SEM. * P 0,05.

Ảnh hưởng của CBD đến tính chất màng bên trong của các tế bào thích nghi biểu hiện CCK neuropeptide

Nói chung, các tế bào CCK SCA hiển thị thời lượng tiềm năng hành động trung gian (0,3 0 0,5 ms theo chiều rộng tăng đột biến; Hình 4). Ở chuột kiểm soát khỏe mạnh, CBD (10) đã thay đổi tính chất màng của tế bào thích nghi, CCK, bằng cách giảm đáng kể số lượng gai trung bình được tạo ra để đáp ứng với việc khử cực 500 ms (Hình 4A, bảng i, đến C, bảng ii; xem thêm Ali, 2007 ). Đã thấy giảm điện trở đầu vào trung bình và hằng số thời gian trong các tế bào SCA kiểm soát khỏe mạnh với điều trị CBD (Hình 4D). Những thay đổi này cũng phù hợp trong các mô hình thu giữ Mg 2+ và KA (xem Bảng 1). Một sự thay đổi bên phải được minh họa trong biểu đồ phân tán điều khiển (đại diện cho số lượng gai tăng khi tiêm dòng dương) đã được quan sát cho thấy giảm mức độ kích thích tế bào CCK SCA với điều trị CBD trong điều khiển khỏe mạnh và cả mô hình động kinh / động kinh (Hình 4A, bảng iii, B, bảng iii, C, bảng iii). Không có sự khác biệt đáng kể về biên độ tiềm năng hành động trung bình, nửa chiều rộng, ngưỡng hoặc AHP được quan sát thấy sau khi áp dụng CBD trong bất kỳ nhóm thử nghiệm nào. Ứng dụng tắm của CBD cũng dẫn đến sự siêu phân cực 10 mV của tiềm năng màng như đã thấy trong các tế bào hình chóp.

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v ... Tên đối tượng là BPH-175-2097-g004.jpg

Mở trong một cửa sổ riênghinh 4

CBD làm giảm tính dễ bị kích thích nội tại của CCK thích nghi trong CA1. Các đặc tính màng của các khối nội mạc SCA, có CCK dương tính, được ghi nhận ở chuột khỏe mạnh (A, bảng i) trong kiểm soát và (A, bảng ii) sau 10 application ứng dụng tắm CBD. Các bản ghi tương tự được hiển thị trong điều kiện không có Mg 2+ (B, bảng i), (B, bảng ii) và trong mô hình động kinh KA (C, bảng i), (C, bảng ii). Các đường cong đầu ra của đầu vào hiển thị mối quan hệ tuyến tính giả giữa số lượng các xung được tạo bằng cách điều chỉnh các tế bào của (A, bảng iii) các loài gặm nhấm khỏe mạnh ( n = 11), (B, bảng iii) Mg 2+ ‐free ( n = 5 ) và (C, bảng iii) KA ( n = 12) mô hình động kinh với tăng tiêm hiện tại. Số lượng tiềm năng hành động của thích ứng nội tạng đã giảm sau khi áp dụng CBD. (D) Các ô vạch biểu thị tính chất màng bên trong của các tế bào thích nghi trong các mô hình động kinh Mg 2+ ‐free ( n = 5) và KA ( n = 12) so với các loài gặm nhấm khỏe mạnh ( n = 11). (D, bảng i) CBD không tạo ra thay đổi rõ ràng về ngưỡng tiềm năng hành động (AP) của các tế bào thích nghi. (D, bảng ii) Điện trở đầu vào và (D, bảng iii) hằng số thời gian đã giảm bởi CBD trong các mô hình bệnh. Kết quả được biểu thị bằng trung bình ± SEM. * P 0,05.

Các inteuron FS, điển hình là PV, cho thấy động học tiềm năng hành động nhanh đặc trưng và tần suất phóng điện tiềm năng hành động cao (với sự thích nghi tần số tăng đột biến và chỗ ở), phù hợp với hằng số thời gian màng nhanh (Bảng 1, Nhân vật 5). Sức khỏe chung của các khối nội tạng được ghi nhận là bị suy giảm đáng kể khi được ghi lại đặc biệt trong mô hình KA, cho thấy ngưỡng tiềm năng hành động giảm, thích ứng tần số tăng đột biến và chỗ ở, đối với việc kiểm soát các tế bào FS, với cùng mức khử cực bước (Hình 5A, bảng i, đến C, bảng ii). Tuy nhiên, các tế bào này không thể duy trì tần suất bắn cao (Hình 5B, bảng i), đề xuất tính chất màng bị suy yếu. Sau khi áp dụng CBD trong 20 phút (10 μM), số lượng tiềm năng hành động tăng lên cùng với lượng thuốc khử cực hiện tại khi các điều kiện kiểm soát được quan sát thấy trong các lát não của chuột kiểm soát khỏe mạnh và trong các mô hình động kinh K 2+ và KA (Nhân vật 5). Quan sát này phù hợp với sự gia tăng đáng kể điện trở đầu vào cho cùng các bước hiện tại siêu phân cực được tiêm như trong điều kiện kiểm soát và hằng số thời gian tăng (Hình 5D). Điện trở đầu vào cao hơn cho thấy sự thay đổi lớn hơn về điện thế màng với sự hiện diện của CBD, cho thấy khả năng kích thích được tăng cường thuận lợi của các tế bào PV FS với thuốc này. Việc tăng cường bắn các tế bào FS với ứng dụng CBD tắm và sức đề kháng đầu vào cũng tương quan với việc giảm đáng kể ngưỡng tiềm năng hành động trung bình và hằng số thời gian trung bình nhanh hơn (Hình 5D), phù hợp trong cả ba điều kiện thí nghiệm được nghiên cứu (xem Bảng 1). Tương tự như các tế bào hình chóp và các tế bào SCA thích nghi, ứng dụng CBD trong bồn tắm cũng dẫn đến sự siêu phân cực 10 mV của điện thế màng trong các tế bào FS.

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v ... Tên đối tượng là BPH-175-2097-g005.jpg

Mở trong một cửa sổ riêngHình 5

CBD tăng cường tính dễ bị kích thích của FS ‐ PV interneuron trong vùng CA1 của đồi hải mã. Các thuộc tính màng của FS eur PV inteuron được ghi nhận ở chuột khỏe mạnh (A, bảng i) trong kiểm soát và (A, bảng ii) sau khi áp dụng tắm 10 μΜ CBD. Tương tự, các tế bào Pv FS Pv cũng được ghi lại trong Mg 2+ ‐free (B, bảng i), (B, bảng ii) và trong các mô hình động kinh KA (C, bảng i), (C, bảng ii). Các đường cong đầu ra của đầu vào hiển thị mối quan hệ tuyến tính giả giữa số lượng các xung được tạo bởi các tế bào PV của (A, bảng iii) các loài gặm nhấm khỏe mạnh ( n = 9), (B, bảng iii) Mg 2+ ‐free ( n = 4) và (C, bảng iii) KA ( n = 7) mô hình động kinh với tăng tiêm hiện tại. Việc khai hỏa của FS ‐ PV interneurons đã tăng lên đáng kể sau khi áp dụng CBD. (D) Các sơ đồ vạch đại diện cho tính chất màng bên trong của các tế bào PV PV trong các mô hình động kinh Mg 2+ ‐free ( n = 4) và KA ( n = 7) so với các loài gặm nhấm khỏe mạnh ( n = 9). (D, bảng i) CBD đã tạo ra ngưỡng giảm tiềm năng hành động (AP) của các tế bào PV PV. (D, bảng ii) Điện trở đầu vào và (D, bảng iii) hằng số thời gian được tăng lên bởi CBD trong các động vật gặm nhấm khỏe mạnh và các mô hình động kinh. Kết quả được biểu thị bằng trung bình ± SEM. * P 0,05.

Những thay đổi về PV‐ và CCK ‐ biểu hiện mật độ và hình thái của inteuron trong bệnh động kinh và sau khi điều trị CBD

Mật độ tế bào trung bình của các tế bào thần kinh biểu hiện PV‐ và CCK in trong ba trường con của sự hình thành vùng đồi thị chuột bao gồm CA1, CA3 và gyrus nha (DG) lần đầu tiên được nghiên cứu và so sánh giữa động vật đối chứng và mô hình động kinh KA. Trong cả ba trường con, mật độ tế bào thần kinh biểu hiện PV‐ và CCK in ở chuột bị động kinh giảm đáng kể so với chuột điều khiển (xem Bảng 2). CA1 đã được kiểm tra chi tiết hơn, và có sự giảm số lượng tế bào biểu hiện PV‐ và CCK in trong stratum oriens (SO), stratum pyramidale (SP), stratum radiatum và stratum lacunosum. Sự giảm mật độ tế bào này đã được giảm bởi CBD ở cả hai thời điểm điều trị (CBD_time0 và CBD_time90). Số liệu 6 và Hay nói, là một tài tài của, qua, qua, qua một tài khác, qua giữ, qua một tài khácvà77minh họa hình thái đuôi gai của PV‐ và CCK ‐ biểu hiện nội mạc ở chuột kiểm soát và chuột bị động kinh do KA gây ra trước và sau khi điều trị bằng CBD. Các phân tích hình thái học của các tế bào thần kinh được tái tạo này đã được thực hiện để so sánh sự thay đổi giữa chuột kiểm soát và động kinh sau khi điều trị CBD tại các thời điểm, 0 và 90 phút của SE. Phân tích Sholl, một thước đo phân bố độ phức tạp của dendritic như là một hàm của khoảng cách từ soma (Sholl, 1953 ), cho thấy sự thỏa hiệp rõ rệt về kích thước soma và sự hình thành sợi nhánh cho cả tế bào biểu hiện PV‐ và CCK (giữa nhóm kiểm soát và nhóm động kinh ( Bàn 2), cũng được ngăn ngừa bằng điều trị CBD, bất kể thời điểm điều trị.

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v ... Tên đối tượng là BPH-175-2097-g006.jpg

Mở trong một cửa sổ riêngHình 6

CBD ngăn chặn sự chết tế bào PV ở vùng đồi thị của chuột bị động kinh do KA gây ra. (A) Tái tạo và quang xúc tác của tất cả các tế bào thần kinh PV có trong trường con hồi hải mã CA1 của một con chuột được chọn ngẫu nhiên trong điều khiển (A, bảng i), (A, bảng ii) động kinh, (A, bảng iii) CBD được điều trị ở mức 0 thời gian (CBD_time0) và (A, bảng iv) ở 90 phút (CBD_time90) post Điều kiện SE sử dụng độ phóng đại 40 × trong kính hiển vi ánh sáng với một ống vẽ kèm theo, từ ba phần vành dày của chuột hippocampi liên tiếp. Trường con hippocampal CA1 bao gồm, SO, SP, và radatum radiatum (SR) và stratum lacunosum phân tử (SLM). Tất cả các máy chụp ảnh quang học lấy từ các tế bào thần kinh PV là từ các phần não được xử lý bằng cách sử dụng nhãn immunoperoxidase. Thanh tỷ lệ được đặt ở mức 250 m cho tất cả các công trình tái tạo và 50 m cho tất cả các máy ảnh quang. (B,n = 20, cho tất cả). Các phân tích hình thái học của các nơ-ron PV (n = 20) đã được thực hiện, được biểu diễn dưới dạng biểu đồ thanh so sánh chiều dài (C, bảng i) của các sợi nhánh chính (μm), (C, bảng ii) các sợi nhánh thứ cấp (m) và (C, bảng iii) diện tích soma (μm 2 ) giữa tất cả các nhóm thử nghiệm. Kết quả được biểu thị bằng trung bình ± SEM (* P ≤ 0,05; ANOVA một chiều với bài kiểm tra Tukey post ).

Một tệp bên ngoài chứa hình ảnh, hình minh họa, v.v ... Tên đối tượng là BPH-175-2097-g007.jpg

Mở trong một cửa sổ riêngHình 7

CBD ngăn chặn sự chết tế bào CCK ở vùng đồi thị của chuột bị động kinh do KA gây ra. (A) Tái tạo và quang xúc tác của tất cả các tế bào thần kinh CCK có trong trường con vùng đồi thị CA1 của một con chuột được chọn ngẫu nhiên trong điều khiển (A, bảng i), (A, bảng ii) động kinh, (A, bảng iii) CBD được điều trị ở mức 0 thời gian (CBD_time0) và (A.iv) sau 90 phút (CBD_time90) post Điều kiện SE sử dụng độ phóng đại 40 × trong kính hiển vi ánh sáng với ống vẽ kèm theo, từ ba phần vành liên tiếp dày 100 ‐ ‐m ‐ của hippocampi. Tất cả các máy chụp ảnh quang học lấy các tế bào thần kinh CCK là từ các phần não được xử lý bằng cách sử dụng nhãn immunoperoxidase. Thanh tỷ lệ được đặt ở mức 250 m cho tất cả các công trình tái tạo và 50 m cho tất cả các máy ảnh quang. (B,n = 20, cho tất cả). Phân tích hình thái học của các tế bào thần kinh CCK ( n = 20) được thực hiện dưới dạng biểu đồ thanh so sánh độ dài (C, bảng i) của các sợi nhánh chính (μm), (C, bảng ii) các sợi nhánh thứ cấp (m) và (C, bảng iii) diện tích soma (μm 2 ) giữa tất cả các nhóm thử nghiệm. Kết quả được biểu thị bằng trung bình ± SEM (* P ≤ 0,05; ANOVA một chiều với bài kiểm tra Tukey post ).

ban 2

Phân tích hình thái và số lượng tế bào của các tế bào biểu hiện đồi thị PV‐ và CCK in trong bệnh động kinh và sau khi điều trị CBD của chuột bị động kinh do KA gây ra

Mật độ tế bào trong các trường con hippocampal mm 3Mật độ tế bào bình thường hóa trong các lớp hồi hải mã mm 3Chiều dài của đuôi gai (mm)Diện tích của soma (mm 2 )
CA1CA3DGVÌ THẾSPSRSLMSơ cấpThứ hai
Kiểm soát ( n = 20)569 ± 37539 ± 120644 ± 104589 ± 1392355 ± 225216 ± 34169 ± 16216 ± 10125 ± 10305 ± 13
Động kinh ( n = 20)172 ± 18170 ± 15269 ± 44128 ± 38847 ± 11649 ± 873 ± 18163 ± 1086 ± 8253 ± 16
CBD_time0 ( n = 20)368 ± 41329 ± 36702 ± 53511 ± 991899 ± 257101 ± 2089 ± 17264 ± 9157 ± 7290 ± 12
CBD_time90 ( n = 20)357 ± 43318 ± 15618 ± 39543 ± 1192036 ± 246111 ± 1136 ± 16259 ± 10151 ± 5236 ± 8
Kiểm soát ‐ động kinh**********
Kiểm soát ‐ CBD_time0*****
Kiểm soát ‐ CBD_time90*****
Động kinh ‐ CBD_time0*****
Động kinh ‐ CBD_time90******
CBD_time0 ‐ CBD_time90*

Mở trong một cửa sổ riêng

CCK ‐ biểu hiện tế bào
Mật độ tế bào trong các trường con hippocampal mm 3Mật độ tế bào bình thường hóa trong các lớp hồi hải mã mm 3Chiều dài của đuôi gai (mm)Diện tích của soma (mm 2 )
CA1CA3DGVÌ THẾSPSRSLMSơ cấpThứ hai
Kiểm soát ( n = 20)305 ± 42272 ± 46484 ± 121171 ± 34563 ± 132316 ± 62308 ± 109164 ± 15104 ± 14222 ± 12
Động kinh ( n = 20)89 ± 14107 ± 7140 ± 840 ± 8130 ± 30147 ± 3442 ± 10105 ± 758 ± 5193 ± 10
CBD_time0 ( n = 20)283 ± 21344 ± 38375 ± 40231 ± 55585 ± 85143 ± 14317 ± 40211 ± 7120 ± 4201 ± 6
CBD_time90 ( n = 20)307 ± 32311 ± 33323 ± 38239 ± 56565 ± 96147 ± 20394 ± 84203 ± 7113 ± 6213 ± 6
Kiểm soát ‐ động kinh*******
Kiểm soát ‐ CBD_time0**
Kiểm soát ‐ CBD_time90**
Động kinh ‐ CBD_time0********
Động kinh ‐ CBD_time90********
CBD_time0 ‐ CBD_time90

Mở trong một cửa sổ riêng

Kết quả được biểu thị bằng trung bình ± SEM.P <0,05.

Một ANOVA một chiều với bài kiểm tra Tukey post hoc đã được sử dụng để phân tích thống kê. Ý nghĩa thống kê đã được kiểm tra giữa các nhóm đối chứng, động kinh và CBD.

Trong mật độ tế bào biểu hiện PV, sự phục hồi đáng kể của PV là rõ ràng ở SO và SP ở chuột bị động kinh, và 87 và 92% tế bào biểu hiện PV kiểm soát trong SO đã được phục hồi tại CBD_time0 và CBD_time90. Tương tự, sự phục hồi 80 và 86% của các tế bào biểu hiện PV kiểm soát đã được nhìn thấy trong SP tại CBD_time0 và CBD_time90, tương ứng, cho thấy khả năng phục hồi tốt hơn sau 90 phút SE.

Các tế bào biểu hiện PV present có trong chuột bị động kinh biểu hiện một cấu hình Sholl của sự dịch chuyển xuống của đường cong từ đường cong điều khiển (Hình 6A). Ngược lại, cấu hình Sholl của các tế bào thần kinh biểu hiện PV của các nhóm được điều trị CBD dịch chuyển lên trên, với một độ lệch nhẹ của đường cong sang trái, từ các nhóm kiểm soát và động kinh (Bảng 2; Nhân vật 6B). Hơn nữa, các phân tích về chiều dài trung bình và số lượng sợi nhánh chính và thứ cấp của các tế bào PV cho thấy sự giảm đáng kể ở động vật động kinh so với đối chứng. Sự cắt ngắn này dường như bị dừng lại và kéo dài vượt quá mức kiểm soát khi chuột bị động kinh được điều trị bằng CBD (Hình 6C, bảng i, ii).

Mật độ tế bào biểu hiện CCK cũng phục hồi đáng kể ở cả ba trường con của đồi hải mã sau khi điều trị CBD, ngang bằng với các mức kiểm soát lành mạnh không có sự khác biệt đáng kể giữa các nhóm được điều trị và CBD (Bảng 2, Nhân vật 7).

Sự biểu hiện của các tế bào biểu hiện CCK ở chuột bị động kinh cho thấy một xu hướng tương tự trong sự thay đổi hình thái đuôi gai trong bệnh động kinh và sau khi điều trị bằng CBD (Hình 7). Cấu hình Sholl của các tế bào biểu hiện CCK của chuột bị động kinh cho thấy sự thay đổi đi xuống, cho thấy sự suy giảm trong sự hình thành đuôi gai so với chuột điều khiển. Sự thay đổi này đã được đảo ngược bằng cách xử lý CBD, ở cả thời điểm 0 và 90, dẫn đến các đường cong Sholl dịch chuyển lên trên, với một độ lệch nhẹ về phía bên trái, vượt quá các mức kiểm soát. So sánh các sợi nhánh của các tế bào CCK được điều trị bằng CBD, bất kể thời gian điều trị, dường như phân nhánh chủ yếu từ soma với sự phân nhánh tối đa ở khoảng cách tăng khoảng 114% (Hình 7C).Đi đến:

Thảo luận

Trong báo cáo này, chúng tôi đã nghiên cứu các cơ chế hoạt động của tế bào CBD, ảnh hưởng đến việc truyền synap, và tính dễ bị kích thích nội tại của các tế bào hình chóp cũng như các tế bào biểu hiện của PV và biểu hiện CCK. Mô hình tiến triển của bệnh động kinh trong mô hình KA gợi nhớ đến sự phát triển của TLE ở người, đặc biệt là sau một sự xúc phạm kết tủa, như chấn thương não khu trú hoặc co giật do sốt, là một trong những nguyên nhân phổ biến nhất của TLE thứ phát (Cavalheiro et al ., 1982 ; Ben ‐ Ari, 1985 ; Ben Ari và Cossart, 2000). Do đó, mô hình này có liên quan đặc biệt đến tình trạng của con người và cung cấp một nền tảng rất phù hợp để nghiên cứu các cơ chế của bệnh và cũng để đánh giá các phương pháp điều trị mới tiềm năng như cannabinoids.

Hơn nữa, dữ liệu của chúng tôi cho thấy vai trò bảo vệ thần kinh đối với CBD, vì điều trị bằng CBD đã cứu sống bệnh lý hình thái của PV‐ và CCK biểu hiện các khối nội mạc tử cung do động kinh.

CBD làm giảm kích thích thông qua kích thích điều chế và ức chế

CBD liên tục giảm truyền synap ở các khớp thần kinh kích thích giữa các tế bào thần kinh hình chóp. Điều thú vị là, việc giảm các EPSP phụ thuộc vào tiềm năng màng và lượng kích thích trước khi sinh. Ví dụ, các tế bào kích thích bắn ở tần số thấp ở trạng thái ít kích thích hơn (−70 mV) không bị ảnh hưởng đáng kể bởi CBD nhưng có ảnh hưởng đáng kể nhất ở tốc độ bắn cao được giữ ở điện thế màng dễ bị kích thích hơn (−55 mV), có thể là thứ yếu đối với các thuộc tính phụ thuộc điện áp của các mục tiêu thụ thể CBD hoặc vào khối phụ thuộc điện áp của các mục tiêu đó bởi CBD. Như GPCR 55 ( http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/F FamilyDisplayForward? F FamilyId = 114 ) ‐mediated Ca 2+độ cao trong các thiết bị đầu cuối glutamatergic hippocampal đã được chứng minh là làm tăng xác suất giải phóng máy phát, hành động đối kháng của CBD cũng có thể góp phần làm giảm sự giải phóng glutamate và do đó, làm giảm sự kích thích trung gian của glutamate trong hippocamp . , 2013 ). Tuy nhiên, như được chỉ định bởi PPR không thay đổi của EPSP sau khi điều trị CBD trong nghiên cứu hiện tại, chúng tôi đề xuất một cơ chế hoạt động sau phẫu thuật đối với cannabinoid này.

Kích hoạt GPR55 cũng dẫn đến ức chế các kênh http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/ObjectDisplayForward?objectId=564 ), do đó làm tăng tính kích thích thần kinh (Lauckner et al., 2008 ). Có lẽ bằng cách kích hoạt http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/ObjectDisplayForward?objectId=561), CBD làm giảm các EPSP tự phát và đơn nhất theo cách phụ thuộc vào điện áp, điều này sẽ giúp giảm bớt tình trạng giảm khả năng gây co giật liên quan đến vùng đồi thị và do đó hạn chế thiệt hại liên quan đến độc tính kích thích. Điều này cũng có thể góp phần vào quá trình siêu phân cực màng nhìn thấy trong các tế bào hình chóp và hai lớp tế bào được nghiên cứu với sự hiện diện của CBD. Một khả năng khác là CBD có tác dụng tương tự THC trong việc kích hoạt protein G posts postynaptic kết hợp với kênh kali được điều chỉnh bên trong, http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/F FamilyInt sinhtionForward? F FamilyId = 74 CBD đã được báo cáo để kích hoạt vanilloid tiềm năng thụ thể thoáng qua ( http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/FamilyDisplayForward?familyId=78) các phân nhóm kênh, là các kênh phối tử, không chọn lọc (Na + , Mg 2+ và Ca 2+ ) (Billeter et al., 2014 ), ở các tiềm năng khác nhau. Agonism nhân http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/ObjectDisplayForward?objectId=507 bày tỏ trong HEK293 tế bào bằng cách CBD đã được báo cáo phổ biến với potencies khác nhau (3-10 mm) (Bisogno et al,. 2001 ; De Petrocellis et al., 2011 ). Các tài liệu hiện có xung quanh vai trò của TRPV1 trong bệnh động kinh bị mâu thuẫn giữa các nghiên cứu khác nhau cho thấy việc kích hoạt TRPV1 không có liên quan (von Ruden et al., 2015), một thuốc chống co giật (Manna và Umedit, 2012 ) hoặc thuốc chống co giật (Chen và cộng sự, 2013 ; Gonzalez Reyes et al., 2013 ) trong bệnh động kinh. Cho dù CBD đang điều chỉnh trực tiếp http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/F FamilyDisplayForward? F FamilyId = 75 hoặc nhắm mục tiêu một thụ thể cannabinoid postynaptic mới hoặc hoạt động đồng bộ với các mục tiêu đã được thiết lập trước đó, ví dụ, GRP55 hoặc TRPV et al., 2011 ; 2012 ; Hill et al., 2012b ; Iannotti và cộng sự, 2014 ), vẫn đang được điều tra.

CBD tăng cường sự ức chế trên các tế bào hình chóp sau synap

Nghiên cứu hiện tại lần đầu tiên báo cáo rằng CBD tăng cường sự ức chế được khơi gợi bằng các hàm nội tuyến PV và CCK nhanh chóng hiển thị chỗ ở và tần số thích ứng tăng đột biến, được gọi là ‘các tế bào CCK thích nghi’ được kết nối với các tế bào hình chóp sau synap. Điều này cuối cùng sẽ dẫn đến việc giảm kích hoạt tế bào hình chóp và giảm tính dễ bị kích thích. Hiện tại, chúng tôi không biết cơ chế hoạt động của hiệu ứng này tại các khớp thần kinh ức chế. Tuy nhiên, bằng chứng trước đây cho thấy rằng CBD không phát huy tác dụng dược lý của nó thông qua các GPCR của hệ thống endocannabinoid, CB 1 và CB 2 , ở cùng mức độ với THC, vì nó có thể có ái lực thấp với hầu như không có hoạt tính chủ vận trên các chất này thụ thể (Pertwee, 2008). Tuy nhiên, chúng tôi không tìm thấy sự thay đổi trong việc tăng cường ức chế qua trung gian CBD với chất đối kháng thụ thể CB 1 chọn lọc AM4113; do đó, sự tham gia của các thụ thể CB 1 trong các thí nghiệm in vitro của chúng tôi có thể được loại bỏ.

CBD thay đổi tính chất bắn bẩm sinh của các tế bào thần kinh cụ thể ở vùng hải mã

Inteuron có kiểu bắn bẩm sinh đặc trưng, cho chúng ta biết thông tin giữa các nơ-ron được chuyển tiếp nhanh như thế nào có thể là một yếu tố góp phần trong sự phát sinh động kinh và sự hình thành. Nghiên cứu này lần đầu tiên cung cấp bằng chứng để đề xuất rằng CBD thay đổi việc bắn các nơ-ron theo kiểu tế bào cụ thể. Trong cả KA và Mg 2+Các mô hình động kinh tự do của bệnh động kinh, các tế bào FS biểu hiện trạng thái dễ bị kích thích hơn trong các tính chất màng của chúng với CBD, được chứng minh bằng ngưỡng thấp hơn của các tiềm năng hành động bắn, tăng hằng số thời gian màng và kháng đầu vào, cuối cùng sẽ tăng mức điện áp của tế bào thần kinh nhanh hơn và lần lượt dẫn đến việc tế bào sẵn sàng hơn để bắn các tiềm năng hành động. Cơ chế chính xác của việc tăng tính dễ bị kích thích của các tế bào FS bởi CBD vẫn chưa được biết; có thể giả thuyết rằng CBD tương tác với các kênh rò rỉ màng làm thay đổi tính thấm của màng đối với các ion natri, hoặc có lẽ CBD trực tiếp điều chỉnh khả năng đệm canxi của PV trong các tế bào FS thay đổi tốc độ bắn. Các tế bào FS thường bẩm sinh soma và đuôi gai của các tế bào hình chóp (Kawaguchi et al., 1987; Freund và Buzsaki, 1996 ) và do đó có thể ức chế trực tiếp sự phóng thích quá mức của các tế bào hình chóp, cho phép chúng xâm nhập và đồng bộ hóa hiệu quả các mạng lưới thần kinh. Tác động của CBD dẫn đến sự phóng thích tế bào thần kinh tăng cường của các tế bào FS sẽ là kết quả được ưa chuộng trong epilespy vì sự gia tăng trực tiếp các tác dụng ức chế có thể góp phần vào sự gia tăng tiến triển của bệnh. Ngược lại, CBD ủng hộ việc giảm bắn thích ứng, các khối nội bào CCK có vai trò trong điều chế mạng, cũng như bắn tế bào hình chóp, được chứng minh bằng việc giảm hằng số thời gian màng và kháng đầu vào ở cả KA và Mg 2+Mô hình miễn phí. Ngẫu nhiên, một sự mất mát đáng kể các tế bào thần kinh hình chóp chính trong cả hippocampi động kinh ở người và động vật gặm nhấm đã được báo cáo (Nadler et al., 1978 ; Babb et al., 1989 ), mặc dù những người khác báo cáo sự phát triển thêm của sợi trục của các tế bào hình chóp. của các mạng kích thích giữa các tế bào thần kinh hình chóp, và có lẽ giải thích sự hiếu động (Perez et al., 1996 ; Esclapez et al., 1999 ). Liệu các hiệu ứng CBD trong việc giảm sự tăng động của tế bào hình chóp được báo cáo ở đây có dẫn đến sự kiên trì của cấu trúc tế bào hình chóp hay không cần được nghiên cứu thêm.

Bằng chứng cho thấy rằng một kênh dẫn K + được kích hoạt nhỏ Ca 2+ làm cơ sở cho việc tạo ra AHP tăng đột biến, điều này rất quan trọng đối với sự tăng tần số tăng đột biến và do đó là đầu ra của các tế bào thần kinh (Lancaster và Nicoll, 1987 ; Sah và Isaacson, 1995 ; Sah và Faber, 2002 ); Mặc dù kênh chính xác liên quan đến hiệu ứng này vẫn chưa được biết, một số nghiên cứu cho rằng việc ức chế các kênh http://www.guidetopharmacology.org/GRAC/ObjectDisplayForward?objectId=560 ) và các kênh K v 7.2 ( KCNQ2 ) chặn AHP chậm tế bào thần kinh hình chóp hippocampal (Shah et al., 2006 ). Liệu CBD có kích hoạt trực tiếp các kênh này hay không, việc tăng cường hiệu ứng AHP chậm để làm giảm tính dễ bị kích thích của tế bào, vẫn chưa được nghiên cứu đầy đủ.

CBD tạm dừng bệnh lý hình thái của hai phân lớp nội tạng chính trong bệnh động kinh

Kết quả tổng thể của chúng tôi cho thấy mật độ giảm đáng kể ở cả tế bào biểu hiện PV‐ và CCK in ở vùng hải mã thích hợp, bao gồm CA1, CA3 và DG. Hơn nữa, chúng tôi đã quan sát những thay đổi về hình thái trong các khối nội tạng này, bao gồm somata bị biến dạng, thu nhỏ và thay đổi, kéo dài và phân nhánh, và giảm tổng thể phức tạp đuôi gai. Những biến dạng trong hình thái và giảm tổng thể mật độ tế bào đã được dừng lại bằng cách điều trị chuột bằng CBD.

Việc giảm mật độ tế bào phù hợp với các nghiên cứu trước đây về động vật gặm nhấm động kinh (Best et al., 1993 ; Buckmaster và Dudek, 1997 ; Dudek et al., 2002 ; Wyeth et al., 2010 ; Jiang et al., 2016 ); tuy nhiên, những người khác đã cho thấy sự mất các tế bào biểu hiện PV hippocampal trong mô thu được từ các bệnh nhân xơ cứng mặc dù sự gia tăng mật độ tế bào thần kinh trong tiểu khung (Andrioli et al., 2007). Việc mất khả năng miễn dịch của PV‐ và CCK is là do chết tế bào hay do thiếu biểu hiện của các tế bào thần kinh vẫn còn đang được tranh luận. Ví dụ, mặc dù mất các tế bào và đuôi gai biểu hiện PV, việc bảo tồn các đầu sợi trục cùng với đầu vào ức chế của các tế bào hình chóp đã được báo cáo trong TLE của con người bằng kính hiển vi điện tử (Wittner et al ., 2001 ).

Sự liên quan sinh lý của những thay đổi hình thái trong các tế bào thần kinh này sẽ ảnh hưởng đến tính toàn vẹn chức năng của các tế bào thần kinh này bao gồm các rối loạn trong kết nối và cách xử lý thông tin (Weinberger, 1999 ). Kết quả là, việc điều chỉnh tốt chức năng của inteuron ở vùng đồi thị động kinh có thể dẫn đến giảm sự ức chế của các tế bào hình chóp (Lancaster và Wheal, 1984 ; Cornish và Wheal, 1989 ; Kobayashi và Buckmaster, 2003 ). Cùng với nhau, việc tăng cường các cơ chế kích thích và kiểm soát sự kích thích không hiệu quả sẽ tạo điều kiện thuận lợi cho việc tạo và truyền hoạt động epileptiform (de Lanerolle et al., 1989 ).

Các cơ chế về cách CBD thực hiện một hành động bảo vệ thần kinh có thể liên quan đến việc giảm stress oxy hóa. Trong nghiên cứu hiện tại, việc sử dụng KA cho chuột để gây động kinh gây ra sự kích hoạt liên tục các thụ thể AMPA / kainate glutamate gây ra một dòng tế bào thần kinh duy trì Na + và Ca 2+ , gây ra khử cực kéo dài và dòng Ca 2+ kéo dài . Tuy nhiên, các nghiên cứu trước đây cho thấy rằng CBD thực hiện kiểm soát hai pha phụ thuộc vào mức độ Ca 2+ (Ryan et al., 2009 ); do đó, có khả năng trong các thí nghiệm của chúng tôi, điều trị CBD trên chuột bị động kinh đã thực hiện chức năng bảo vệ thần kinh bằng cách ngăn ngừa Ca 2+ nội bàoquá tải trong quá trình tăng động, do đó tạm dừng căng thẳng oxy hóa. Điều này sẽ kích hoạt quá trình oxy hóa ty thể (Hajnoczky et al., 2006 ), góp phần vào quá trình thoái hóa tế bào thần kinh (Liang et al., 2000 ; Patel, 2004 ; Waldbaum et al., 2010 ).

Chúng tôi đã quan sát thấy sự gia tăng mật độ tế bào biểu hiện PV‐ và CCK, cũng như sự gia tăng chiều dài đuôi sau điều trị CBD, và trong khi khái niệm về sự hình thành thần kinh trưởng thành đã gây tranh cãi, nó được chứng minh bằng các nghiên cứu cho thấy sự điều biến của các thụ thể khác nhau và con đường truyền tín hiệu của họ, chẳng hạn như GPCR (Kaplan và Hinds, 1977 ; Doze và Perez, 2012 ; Goncalves et al., 2016 ). Ví dụ, sự hình thành tế bào thần kinh ở cả tế bào gốc và tế bào thần kinh đồi thị trưởng thành và nuôi cấy đã được chứng minh thông qua việc kích hoạt GPCR, thụ thể CB 1 và tín hiệu ERK của CBD và các cannabinoids tổng hợp khác (Jiang et al., 2005). Hơn nữa, CBD đã được liên quan đến sự tăng sinh qua trung gian thụ thể CB 1 và sự trưởng thành của các tế bào tiền thân (Wolf et al ., 2010 ). Mặc dù các hành động CBD được thiết lập thông qua các thụ thể CB 1 là rất ít, nhưng có thể cho rằng các tác động dễ gây ra của CBD trong các kết quả được báo cáo là hậu quả của các GPCR kích hoạt tuần tự và các thụ thể CB 1 . Do đó, CBD có thể tạo ra một cơ chế tự sửa chữa hình thái của các tế bào thần kinh biểu hiện PV‐ và CCK surv còn sót lại thông qua sự hình thành thần kinh ở đồi thị động kinh trưởng thành của chuột.

Tóm lại, hình thái suy yếu của các tế bào nội mô và tế bào hình chóp được báo cáo ở đây và bởi những người khác sau hoạt động co giật có thể góp phần vào các cơ chế ức chế bị suy yếu ở bệnh hippocampi, và bằng chứng hiện tại về sự tái tổ chức của mạch thần kinh có thể góp phần vào sự phát sinh và lan truyền của tế bào thần kinh. của các quần thể tế bào thần kinh lớn làm nền cho hoạt động epileptiform. Việc giảm các đặc tính bắn của các tế bào hình chóp ở vùng đồi thị do CBD gây ra cho thấy rằng nó làm giảm tính dễ bị kích thích, trong khi sự gia tăng các đặc tính bắn vào các khối nội tạng cụ thể cho thấy rằng CBD sẽ tăng cường sự ức chế ở một số khớp thần kinh, cuối cùng dẫn đến sự cân bằng lại kích thích, do đó hỗ trợ chúng ta giả thuyết. Cơ chế tế bào chính xác của các thụ thể trước và sau synap liên quan đến những thay đổi này, tuy nhiên, yêu cầu điều tra thêm. Dược tính đối với các thuốc chống động kinh thông thường là một vấn đề chưa được giải quyết trong lĩnh vực động kinh dẫn đến tỷ lệ điều trị thất bại cao hơn ở bệnh nhân động kinh. Các cơ chế hoạt động mà các thuốc chống động kinh dược lý hiện có hoạt động, ví dụ, ngăn chặn các kênh natri điện áp, chỉ ngăn chặn sự phóng điện thần kinh theo cơ chế phụ thuộc vào tốc độ. Thuốc chẹn kênh Na, như carbamazepine và valproate, được sử dụng rộng rãi trong điều trị TLE, nhưng tác dụng phụ nguy hiểm và tăng nguy cơ tự tử thường hạn chế sử dụng thuốc hoặc dẫn đến sử dụng thuốc chống động kinh thứ hai (liệu pháp bổ trợ). CBD là một hợp chất thực vật có nguồn gốc tự nhiên được nhắm mục tiêu nhiều với ít hoặc không có tác dụng phụ.Đi đến:

Sự đóng góp của tác giả

AAK đã thực hiện các thí nghiệm điện sinh lý toàn tế bào, thí nghiệm thần kinh và phân tích dữ liệu và đóng góp vào việc chuẩn bị bản thảo. TS A. thực hiện các thí nghiệm in vivo để tạo ra mô hình động kinh KA. AK đã thực hiện các thí nghiệm in vivo để tạo ra mô hình động kinh KA. MCW đã cung cấp kinh phí để tạo ra các thí nghiệm in vivo để tạo ra mô hình động kinh KA và hỗ trợ chuẩn bị bản thảo. ABA đã thiết kế và điều phối dự án, thực hiện tất cả các bản ghi ô toàn bộ được ghép nối, bản ghi toàn bộ ô và phân tích dữ liệu và chuẩn bị bản thảo.Đi đến:

Xung đột lợi ích

Các tác giả tuyên bố không có xung đột lợi ích.Đi đến:

Tuyên bố minh bạch và chặt chẽ khoa học

Đây http://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/bph.13405/abstract thừa nhận rằng báo cáo này tuân thủ các nguyên tắc cho báo cáo minh bạch và chặt chẽ khoa học của nghiên cứu tiền lâm sàng khuyến cáo của các cơ quan, nhà xuất bản và các tổ chức khác tài trợ tham gia với việc hỗ trợ nghiên cứu .Đi đến:

Sự nhìn nhận

Các tác giả xin cảm ơn cô Foteini Tsouki trong việc hỗ trợ phân tích hình thái học và Tiến sĩ Andrew Constanti (Trường Dược UCL Vương quốc Anh) vì những bình luận vô giá của mình khi chuẩn bị bản thảo này. Các thí nghiệm đã được thực hiện bằng thiết bị được tài trợ bởi Wellcome Trust (Anh) và Hội đồng nghiên cứu y tế (Anh) trao cho ABA ( GO501263 ).Đi đến:

Ghi chú

Khan, AA, Shekh ‐ Ahmad, T., Khalil, A., Walker, MC và Ali, AB (2018) Cannabidiol phát huy tác dụng chống động kinh bằng cách khôi phục chức năng nội tạng hồi hải mã trong mô hình động kinh thùy thái dương . Tạp chí dược học Anh , 175 : 2097 Từ2115. doi: 10.111 / bph.14202 . [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]Đi đến:

Người giới thiệu

  • Ali AB (2007). Ức chế tiền sinh của thụ thể GABAA AA IPSPs đơn nhất qua trung gian bởi các thụ thể cannabinoid tại các khớp thần kinh giữa các tế bào dương tính CCK h ở đồi thị chuột . J Neurophysiol 98 : 861 Ném869. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Alexander SPH, Barsoulos A, Davenport AP, Kelly E, Marrion NV, Peters JA et al (2017a). Concise Hướng dẫn DƯỢC LỰC HỌC 2017/18: thụ thể protein-coupled G . Br J Pharmacol 174 ( Cung 1 ): S17 hạ S129. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Alexander SPH, Peters JA, Kelly E, Marrion NV, Faccenda E, Harding SD et al (2017b). Hướng dẫn ngắn gọn về DƯỢC LIỆU 2017/18: Các kênh ion bị phối tử . Br J Pharmacol 174 ( Cung 1 ): S130 cấp S159. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Alexander SPH, Striessnig J, Kelly E, Marrion NV, Peters JA, Faccenda E et al (2017c). Hướng dẫn ngắn gọn về DƯỢC LIỆU 2017/18: Các kênh ion có điện áp . Br J Pharmacol 174 ( Cung 1 ): S160, S194. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Alexander A, Maroso M, Soltesz I (2016). Tổ chức và kiểm soát các mạch động kinh trong động kinh thùy thái dương . Prog Brain Res 226 : 127 Bóng 154. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Andrioli A, Alonso Nanclares L, Arellano JI, Defelipe J (2007). Phân tích định lượng parvalbumin par tế bào miễn dịch ở vùng đồi thị động kinh ở người . Khoa học thần kinh 149 : 131 Từ143. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Ascoli GA và cộng sự (2008). Thuật ngữ Petilla: danh pháp các tính năng của nội tạng GABAergic của vỏ não . Nat Rev Neurosci 9 : 557 bóng568. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Babb TL, Pretorius JK, Kupfer WR, Crandall PH (1989). Glutamate decarboxylase tế bào thần kinh miễn dịch được bảo tồn trong đồi thị động kinh ở người . J Neurosci 9 : 2562 Từ2574. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Bausch SB (2005). Sự nảy mầm của sợi thần kinh GABAergic trong động kinh thùy thái dương . Bệnh động kinh Hành vi 7 : 390 Hàng400. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Bến ‐ Ari Y (1985). Động kinh Limbic và tổn thương não do axit kainic tạo ra: cơ chế và sự liên quan đến động kinh thùy thái dương của con người . Khoa học thần kinh 14 : 375 Máy403. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Ben ‐ Ari Y, Cossart R (2000). Kainate, một tác nhân kép tạo ra các cơn động kinh: hai thập kỷ tiến bộ . Xu hướng Neurosci 23 : 580 Chiếc587. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Best N, Mitchell J, Baimbridge KG, Wheal HV (1993). Những thay đổi trong parvalbumin tế bào thần kinh miễn dịch ở vùng đồi thị chuột sau một tổn thương axit kainic . Neurosci Lett 155 : 1 bóng6. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Bialer M, Johannessen SI, Levy RH, Perucca E, Tomson T, White HS (2015). Báo cáo tiến độ về thuốc chống động kinh mới: tóm tắt về Hội nghị Eilat lần thứ mười hai (EILAT XII) . Động kinh Res 111 : 85 Từ141. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Billeter AT, Hellmann JL, Bhatnagar A, Polk HC (2014). Các kênh ion tiềm năng thoáng qua điều chỉnh mạnh mẽ chức năng tế bào . Ann phẫu thuật 259 : 229 nhiệt235. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Bisogno T, Hanus L, De Petrocellis L, Tchilibon S, Ponde DE, Brandi I et al (2001). Các mục tiêu phân tử cho cannabidiol và các chất tương tự tổng hợp của nó: tác dụng lên các thụ thể VR1 vanilloid và sự hấp thu tế bào và thủy phân enzyme của anandamide . Br J Pharmacol 134 : 845 Từ852. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Bouilleret V, Loup F, Kiener T, Marescaux C, Fritschy JM (2000). Mất sớm các khối nội mạc và chậm tiểu đơn vị những thay đổi cụ thể trong biểu hiện ‐receptor GABA (A) trong mô hình chuột của bệnh động kinh thùy thái dương . Hippocampus 10 : 305 [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Buckmaster PS, Dudek FE (1997). Mất tế bào thần kinh, tái tổ chức sợi trục tế bào hạt, và thay đổi chức năng trong ngà răng của chuột bị động kinh kainate . J Comp Neurol 385 : 385 Hậu404. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Buckmaster PS, Jongen ‐ Relo AL (1999). Mất tế bào thần kinh đặc hiệu cao bảo tồn các mạch ức chế bên trong ngà răng của chuột bị động kinh do kainate gây ra . J Neurosci 19 : 9519 Từ9529. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Buhl EH, Otis TS, Mody I (1996). Kẽm gây ra sự sụp đổ của ức chế tăng cường bởi GABA trong một mô hình động kinh thùy thái dương . Khoa học 271 : 369 bóng373. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Cavalheiro EA, Riche DA, Le Gal La Salle G (1982). Tác dụng lâu dài của tiêm axit kainic tiêm bắp ở chuột: một phương pháp gây co giật tái phát tự phát . Electroencephalogr Clinic Neurophysiol 53 : 581 Tai589. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Cavazos JE, Das I, Sutula TP (1994). Mất tế bào thần kinh gây ra trong các con đường limbic bằng cách xúi giục: bằng chứng gây ra bệnh xơ cứng vùng đồi thị bằng các cơn động kinh ngắn lặp đi lặp lại . J Neurosci 14 : 3106 bóng3121. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Chen CY, Li W, Qu KP, Chen CR (2013). Piperine có tác dụng chống co giật thông qua thụ thể TRPV1 ở chuột . Eur J Pharmacol 714 : 288 Công294. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Consroe P, Benedito MA, Leite JR, Carlini EA, Mechoulam R (1982). Tác dụng của cannabidiol đối với co giật hành vi gây ra bởi thuốc co giật hoặc hiện tại ở chuột . Eur J Pharmacol 83 : 293 bóng298. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Consroe P, Wolkin A (1977). So sánh thuốc chống động kinh Cannabidiol, so sánh và tương tác trong các cơn động kinh gây ra trên thực nghiệm ở chuột . J Pharmacol Exp Ther 201 : 26 Công32. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Cornish SM, Wheal HV (1989). Mất thời gian dài của ức chế xung ghép đôi trong vùng đồi thị bị tổn thương do axit kainic của chuột . Khoa học thần kinh 28 : 563 Bắn571. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Curtis MJ, Bond RA, Spina D, Ahluwalia A, Alexander SP, Giembycz MA et al (2015). Thiết kế và phân tích thử nghiệm và báo cáo của họ: hướng dẫn mới để xuất bản trong BJP . Br J Pharmacol 172 : 3461 Từ3471. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • de Lanerolle NC, Kim JH, Robbins RJ, Spencer DD (1989). Mất nội tạng Hippocampal và độ dẻo trong động kinh thùy thái dương của con người . Não Res 495 : 387 [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • De Petrocellis L, Ligresti A, Moriello AS, Allara M, Bisogno T, Petrosino S et al (2011). Tác dụng của cannabinoid và chiết xuất Cannabis được làm giàu trên các kênh TRP và các enzyme chuyển hóa endocannabinoid . Br J Pharmacol 163 : 1479 Từ1494. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • De Petrocellis L, Orlando P, Moriello AS, Aviello G, Stott C, Izzo AA et al (2012). Tác dụng của Cannabinoid tại các kênh TRPV: ảnh hưởng đến TRPV3 và TRPV4 và khả năng liên quan đến viêm đường tiêu hóa . Acta Physiol (Oxf) 204 : 255 Mạnh266 . [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Defelipe J (1999). Tế bào đèn chùm và động kinh . Não 122 ( Pt 10 ): 1807 Từ1822. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Devinsky O, Cross JH, Laux L, Marsh E, Miller I, Nabbout R et al (2017). Cannabidiol trong thử nghiệm nghiên cứu hội chứng Drainvet của cannabidiol trong điều trị co giật kháng thuốc trong hội chứng Drainvet . N Engl J Med 376 : 2011 20152020. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Doze VA, Perez DM (2012). Các thụ thể G ‐ protein kết hợp trong sự hình thành thần kinh trưởng thành . Pharmacol Rev 64 : 645 mỏ675. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Dudek FE, Hellier JL, Williams PA, Ferraro DJ, Staley KJ (2002). Quá trình thay đổi tế bào liên quan đến sự phát triển của co giật tự phát sau khi động kinh trạng thái . Prog Brain Res 135 : 53 Hàng65. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Esclapez M, Hirsch JC, Ben ‐ ari Y, Bernard C (1999). Con đường kích thích mới được hình thành cung cấp một chất nền cho khả năng hạ huyết áp trong động kinh thùy thái dương thực nghiệm . J Comp Neurol 408 : 449 Từ460. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Freund TF, Buzsaki G (1996). Nội bào của đồi hải mã . Hippocampus 6 : 347 Hàng470. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Fritschy JM, Kiener T, Bouilleret V, Loup F (1999). Các tế bào thần kinh GABAergic và GABA (A) ‐receptors trong động kinh thùy thái dương . Neurochem Int 34 : 435 Tua445. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Gaston TE, Friedman D (2017). Dược lý của cannabinoids trong điều trị động kinh . Động kinh Hành vi 70 : 313 Từ318. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Goncalves JT, Schafer ST, Gage FH (2016). Phát triển thần kinh trưởng thành ở vùng hải mã: từ tế bào gốc đến hành vi . Tế bào 167 : 897-914. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Gonzalez ‐ Reyes LE, Ladas TP, Chiang CC, Durand DM (2013). Capsazepine đối kháng TRPV1 ức chế 4 ‐ AP gây ra hoạt động epileptiform trong ống nghiệm và co giật điện trong in vivo . Exp Neurol 250 : 321 Hàng32. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Gorter JA, Van Vliet EA, Aronica E, Lopes Da Silva FH (2001). Sự tiến triển của các cơn động kinh tự phát sau khi động kinh trạng thái có liên quan đến sự nảy mầm của sợi rêu và mất hai bên của parvalbumin vui nhộn và somatostatin tế bào thần kinh miễn dịch . Eur J Neurosci 13 : 657 Từ669. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Hajnoczky G, Csordas G, Das S, Garcia Perez C, Saotome M, Sinha Roy S et al (2006). Tín hiệu canxi ty thể và chết tế bào: phương pháp tiếp cận để đánh giá vai trò của sự hấp thu Ca2 + của ty thể trong quá trình apoptosis . Tế bào Canxi 40 : 553 Bắn560. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Harding SD, Sharman JL, Faccenda E, Southan C, Pawson AJ, Ireland S et al (2018). Hướng dẫn IUPHAR / BPS về DƯỢC LIỆU năm 2018: cập nhật và mở rộng để bao gồm hướng dẫn mới về IMMUNOPHARMACITALY . Axit hạt nhân Res 46 : D1091 Nhận D1106. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Hill AJ, Mercier MS, Hill TD, Glyn SE, Jones NA, Yamasaki Y et al (2012a). Cannabidivarin là thuốc chống co giật ở chuột và chuột . Br J Pharmacol 167 : 1629 Từ1642. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Hill AJ, Williams CM, Whalley BJ, Stephens GJ (2012b). Phytocannabinoids là tác nhân trị liệu mới trong các rối loạn thần kinh trung ương . Pharmacol Ther 133 : 79 mộc97. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Iannotti FA, Hill CL, Leo A, Alhusaini A, Soubrane C, Mazzarella E et al (2014). Các loại cannabinoids thực vật, cannabidivarin (CBDV) và cannabidiol (CBD), kích hoạt và giải mẫn cảm với các kênh vanilloid 1 (TRPV1) tiềm năng tạm thời trong ống nghiệm: khả năng điều trị chứng suy nhược thần kinh . ACS Chem Nerosci 5 : 1131 Từ1141. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Ibeas bih C, Chen T, Nunn AV, Bazelot M, Dallas M, Whalley BJ (2015). Mục tiêu phân tử của cannabidiol trong rối loạn thần kinh . Thần kinh trị liệu 12 : 699 Từ730. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Jiang W, Zhang Y, Xiao L, Van Cleemput J, Ji SP, Bai G et al (2005). Cannabinoids thúc đẩy sự phát triển thần kinh của hippocampus phôi và trưởng thành và tạo ra các tác dụng giống như anxiolytic‐ và thuốc chống trầm cảm . J Clin Đầu tư 115 : 3104 Từ3116. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Giang X, Lachance M, Rossignol E (2016). Sự tham gia của vỏ não nhanh par đi xe đạp parvalbumin cells tế bào giỏ dương tính trong bệnh động kinh . Prog Brain Res 226 : 81 Kho 126. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Jones Davis D, Calcagnotto M ‐ E, Sebe JY (2009). Mất nội tạng vì nguyên nhân của các cơn động kinh: Bài học từ Inteuron ‐ Chuột thiếu: Baraban SC. (chủ biên). Mô hình động vật của bệnh động kinh: Phương pháp và đổi mới . Totowa, NJ: Báo chí Humana. [ Học giả Google ]
  • Jones NA, Glyn SE, Akiyama S, Hill TD, Hill AJ, Weston SE et al (2012). Cannabidiol có tác dụng chống co giật trong mô hình động vật của thùy thái dương và co giật một phần . Thu giữ 21 : 344 Từ352. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Jones NA, Hill AJ, Smith I, Bevan SA, Williams CM, Whalley BJ et al (2010). Cannabidiol hiển thị các đặc tính chống động kinh và antiseizure in vitro và in vivo . J Pharmacol Exp Ther 332 : 569 Vang577. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Kandratavicius L, Balista PA, Lopes Aguiar C, Ruggiero RN, Umeoka EH, Garcia Cairasco N et al (2014). Mô hình động vật của động kinh: sử dụng và hạn chế . Neuropsychiatr Dis Treat 10 : 1693 Từ1705. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Kaplan MS, Hinds JW (1977). Neurogenesis ở chuột trưởng thành: phân tích kính hiển vi điện tử của phóng xạ ánh sáng . Khoa học 197 : 1092 Vang1094. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Kawaguchi Y, Katsumaru H, Kosaka T, Heizmann CW, Hama K (1987). Các tế bào tăng tốc nhanh ở đồi hải mã chuột (vùng CA1) có chứa parvalbumin protein liên kết với canxi . Não Res 416 : 369 [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Kilkenny C, Browne W, Cuthill IC, Emerson M, Altman DG (2010). Nghiên cứu động vật: báo cáo thí nghiệm in vivo: hướng dẫn ARRIVE . Br J Pharmacol 160 : 1577 Từ1579. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Kobayashi M, Buckmaster PS (2003). Giảm sự ức chế của các tế bào hạt răng trong một mô hình của động kinh thùy thái dương . J Neurosci 23 : 2440 Mạnh2452. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Kogan NM, Mechoulam R (2007). Cannabinoids trong sức khỏe và bệnh tật . Đối thoại lâm sàng Neurosci 9 : 413 Hay430. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Lancaster B, Nicoll RA (1987). Tính chất của hai siêu phân cực kích hoạt canxi trong các tế bào thần kinh đồi thị chuột . J Physiol 389 : 187 Từ 203. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Lancaster B, Wheal HV (1984). Thất bại mãn tính của sự ức chế khu vực CA1 của đồi hải mã sau các tổn thương axit kainic của khu vực CA3 / 4 . Brain Res 295 : 317 Công ty. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Lauckner JE, Jensen JB, Chen HY, Lu HC, Hille B, Mackie K (2008). GPR55 là một thụ thể cannabinoid làm tăng canxi trong tế bào và ức chế M hiện tại . Proc Natl Acad Sci USA 105 : 2699 Mạnh2704. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Levesque M, Avoli M, Bernard C (2016). Các mô hình động vật của động kinh thùy thái dương sau khi dùng thuốc chống co giật toàn thân . Phương pháp J Neurosci 260 : 45 bóng52. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Liang LP, Hồ YS, Patel M (2000). Sản xuất superoxide của ty thể trong tổn thương vùng đồi thị do kainate gây ra . Khoa học thần kinh 101 : 563 bóng570. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Liu YQ, Yu F, Liu WH, He XH, Peng BW (2014). Rối loạn chức năng của hồi hải mã trong động kinh . Neurosci Bull 30 : 985 Từ 1998. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Manna SS, Umedit SN (2012). Sự tham gia của các kênh vanilloid loại 1 tiềm năng thoáng qua trong tác dụng gây co giật của anandamide trong co giật do pentylenetetrazole gây ra . Động kinh Res 100 : 113 [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • McGrath JC, Lilley E (2015). Thực hiện các hướng dẫn về báo cáo nghiên cứu sử dụng động vật (ARRIVE, v.v.): các yêu cầu mới để xuất bản trong BJP . Br J Pharmacol 172 : 3189 Từ3193. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Nadler JV, Perry BW, Cotman CW (1978). Axit kainic tiêm tĩnh mạch ưu tiên phá hủy các tế bào hình chóp hippocampal . Thiên nhiên 271 : 676 Từ677. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Patel M (2004). Rối loạn chức năng ty thể và stress oxy hóa: nguyên nhân và hậu quả của động kinh động kinh . Biol miễn phí Medol Med 37 : 1951 Từ1962. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Perez Y, Morin F, Beaulieu C, Lacaille JC (1996). Sự nảy mầm của các tế bào hình chóp CA1 trong các lát hồi hải mã của chuột kainate được điều trị bằng hyperexcitable . Eur J Neurosci 8 : 736 Mạnh748. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Pertwee RG (2008). Dược lý thụ thể CB1 và CB2 đa dạng của ba loại cannabinoids thực vật: delta9 tetrahydrocannabinol, cannabidiol và delta9 tetrahydrocannabivarin . Br J Pharmacol 153 : 199 Từ215. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Hoàng tử DA, Jacobs KM, Salin PA, Hoffman S, Parada I (1997). Bệnh động kinh khu trú mới mãn tính khu trú: sự mất tập trung có vai trò gì không? Có thể J Physiol Pharmacol 75 : 500. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Racine RJ (1972). Sửa đổi hoạt động co giật bằng kích thích điện. II. Động cơ bị co giật . Electroencephalogr Clinic Neurophysiol 32 : 281 Phản294. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Ristanovic D, Milosevic NT, Stulic V (2006). Áp dụng phân tích Sholl đã được sửa đổi để hình thành sợi nhánh thần kinh của tủy sống mèo . Phương pháp J Neurosci 158 : 212 trừ218. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Rubinstein M, Han S, Tai C, Westenbroek RE, Hunker A, Scheuer T et al (2015). Phân tích các kiểu hình của hội chứng Dravet bằng cách xóa gen . Não 138 : 2219 Từ2233. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Ryan D, Drysdale AJ, Lafourcade C, Pertwee RG, Platt B (2009). Cannabidiol nhắm vào ty thể để điều chỉnh nồng độ Ca2 + nội bào . J Neurosci 29 : 2053 bóng2063. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Sah P, Faber ES (2002). Các kênh nằm dưới canxi tế bào thần kinh ‐ dòng kali hoạt hóa . Prog Neurobiol 66 : 345 Điêu353. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Sah P, Isaacson JS (1995). Các kênh nằm dưới quá trình khử cực chậm trong các tế bào thần kinh hình chóp hippocampal: dẫn truyền thần kinh điều chỉnh xác suất mở . Neuron 15 : 435 mộc441. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Shah MM, Javadzadeh ‐ Tabatabaie M, Benton DC, Ganellin CR, Haylett DG (2006). Tăng cường khả năng kích thích tế bào hình chóp hippocampal bằng thuốc chẹn kênh chọn lọc chậm ‐ afterhyperpolarization 3‐ (triphenylmethylaminomethyl) pyridine (UCL2077) . Mol Pharmacol 70 : 1494 19011502. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Sholl DA (1953). Tổ chức đuôi gai trong các tế bào thần kinh của vỏ thị giác và vận động của con mèo . J Anat 87 : 387 mỏ406. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Sylantyev S, Jensen TP, Ross RA, Rusakov DA (2013). GPR55 thụ thể nhạy cảm Cannabinoid‐ và lysophosphatidylinositol tăng cường giải phóng chất dẫn truyền thần kinh tại các khớp thần kinh trung tâm . Proc Natl Acad Sci USA 110 : 5193 Hay5198. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Von Ruden EL, Jafari M, Bogdanovic RM, Wotjak CT, Potschka H (2015). Phân tích ở thụ thể cannabinoid 1 có điều kiện mice chuột bị loại ra cho thấy sự phân hóa tế bào thần kinh effects ảnh hưởng cụ thể đến sự phát sinh động kinh trong mô hình gây bệnh . Neurobiol Dis 73 : 334 Từ347. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Waldbaum S, Liang LP, Patel M (2010). Suy giảm dai dẳng tình trạng oxy hóa mô và ty thể trong quá trình phát sinh động kinh do lithium ‐ pilocarpine gây ra . J Neurochem 115 : 1172 Từ1182. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Weinberger DR (1999). Sinh học tế bào của sự hình thành vùng đồi thị trong tâm thần phân liệt . Biol Tâm thần học 45 : 395 Từ 107. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Wiebe S (2000). Dịch tễ học động kinh thùy thái dương . Can J Neurol Sci 27 ( Cung 1 ): Thảo luận về S610 S10 S20. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Wittner L, Eross L, Czirjak S, Halasz P, Freund TF, Magloczky Z (2005). Các tế bào hình chóp CA1 còn sót lại nhận được đầu vào ức chế perisomatic nguyên vẹn ở vùng đồi thị động kinh ở người . Não 128 : 138 bóng52. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Wittner l, Magloczky Z, Borhegyi Z, Halasz PO, Toth S, Eross l et al (2001). Bảo quản đầu vào ức chế perisomatic của các tế bào hạt trong gyrus nha khoa con người động kinh . Khoa học thần kinh 108 : 587, 600. [ PubMed ] [ Học giả Google ]
  • Sói SA, Bick Sander A, Fabel K, Leal Galicia P, Tauber S, RAmirez Rodriguez G et al (2010). Thụ thể Cannabinoid CB1 làm trung gian cơ sở và hoạt động ‐ gây ra sự sống sót của các tế bào thần kinh mới trong sự hình thành thần kinh vùng đồi thị trưởng thành . Tín hiệu cộng đồng di động 17 : 8 trận12. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]
  • Wyeth MS, Zhang N, Mody I, Houser CR (2010). Giảm chọn lọc cholecystokinin, bảo tồn tế bào giỏ dương tính trong một mô hình động kinh thùy thái dương . J Neurosci 30 : 8993 bóng9006. [ Bài viết miễn phí PMC ] [ PubMed ] [ Google Scholar ]